猪伪狂犬病病毒FZ株的分离鉴定及gD基因的克隆
| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 病原学 | 第11-15页 |
| ·分类地位 | 第11页 |
| ·病毒特征 | 第11页 |
| ·PRV的基因组 | 第11-12页 |
| ·PRV的糖蛋白 | 第12-15页 |
| ·毒力相关基因 | 第15页 |
| 2 生物学特性 | 第15-16页 |
| ·抗原性 | 第15-16页 |
| ·致病性 | 第16页 |
| ·潜伏感染 | 第16页 |
| 3 临床症状 | 第16-17页 |
| 4 流行病学 | 第17页 |
| 5 病理变化及发病机理 | 第17-18页 |
| 6 诊断及防制 | 第18-21页 |
| ·病毒分离 | 第18页 |
| ·动物试验 | 第18页 |
| ·免疫荧光技术 | 第18-19页 |
| ·病理组织学检查 | 第19页 |
| ·血清学诊断方法 | 第19-20页 |
| ·聚合酶链反应 | 第20-21页 |
| 7 PRV基因工程缺失苗研究进展 | 第21-24页 |
| ·单基因缺失疫苗 | 第21页 |
| ·双基因缺失疫苗 | 第21-23页 |
| ·多基因缺失疫苗 | 第23-24页 |
| 第二部分 试验内容 | 第24-56页 |
| 1 材料与方法 | 第24-31页 |
| ·试验材料 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-31页 |
| ·病毒分离 | 第25页 |
| ·病毒的克隆纯化及蚀斑计算 | 第25-26页 |
| ·病毒增殖 | 第26页 |
| ·电镜观察 | 第26页 |
| ·病毒TCID_(50)的测定 | 第26页 |
| ·病毒中和试验 | 第26页 |
| ·病毒的血凝试验 | 第26页 |
| ·病毒理化性质 | 第26-27页 |
| ·动物试验 | 第27页 |
| ·鸡胚绒毛尿囊膜接种试验 | 第27页 |
| ·荧光抗体试验 | 第27页 |
| ·PRV gD基因的克隆 | 第27-31页 |
| ·细胞培养物的处理 | 第27-28页 |
| ·PRV DNA的提取 | 第28页 |
| ·PCR扩增gD基因 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的回收 | 第29页 |
| ·PCR回收产物酶切 | 第29页 |
| ·gD基因重组 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第30页 |
| ·重组质粒的转化 | 第30页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·gD基因测序及序列分析 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-52页 |
| ·细胞病变观察 | 第31-35页 |
| ·病毒蚀斑 | 第35页 |
| ·电镜观察结果 | 第35-36页 |
| ·病毒TCID_(50)测定结果 | 第36-37页 |
| ·中和试验结果 | 第37页 |
| ·病毒的血凝试验(HA)结果 | 第37页 |
| ·病毒理化特性结果 | 第37-38页 |
| ·动物试验结果 | 第38-41页 |
| ·鸡胚绒毛尿囊膜接种试验结果 | 第41页 |
| ·荧光抗体试验结果 | 第41-42页 |
| ·PCR扩增gD基因 | 第42页 |
| ·gD基因产物回收 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43页 |
| ·gD基因测序及序列分析结果 | 第43-52页 |
| 3 分析与讨论 | 第52-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录一:质粒PCAGGS多克隆位点图谱 | 第60-61页 |
| 附录二:PRV FZ株gD基因的核苷酸序列 | 第61页 |
| 附录三:PRV FZ株gD基因的氨基酸序列 | 第61页 |
| 附录四:英文缩略词 | 第61-62页 |
| 附录五:有关试剂和溶液的配制方法 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
