| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-18页 |
| 第一章 综述 | 第18-46页 |
| 1.聚苯胺 | 第18-23页 |
| ·聚苯胺的研究历史 | 第18页 |
| ·聚苯胺的结构、特性及导电机制 | 第18-21页 |
| ·聚苯胺的合成、应用及研究进展 | 第21-23页 |
| 2.酶催化法合成聚苯胺 | 第23-27页 |
| ·酶催化聚合 | 第23-26页 |
| ·酶催化苯胺类化合物聚合反应 | 第26-27页 |
| 3.辣根过氧化物酶 | 第27-30页 |
| ·HRP的结构 | 第27-29页 |
| ·HRP的作用机制 | 第29-30页 |
| 4.酶分子的体外定向进化 | 第30-38页 |
| ·酶分子的体外定向进化[81] | 第30-31页 |
| ·定向进化的原理 | 第31-32页 |
| ·酶分子定向进化策略与技术 | 第32-36页 |
| ·酶分子定向进化技术的应用及研究进展 | 第36-38页 |
| 5.总结 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 第二章 HRP基因的克隆 | 第46-68页 |
| 1.前言 | 第46页 |
| 2.试剂与仪器 | 第46-47页 |
| 3.辣根总RNA提取 | 第47-49页 |
| ·总RNA的提取 | 第47-48页 |
| ·总RNA的分析检测 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-49页 |
| 4.RT-PCR法钓取hrp | 第49-57页 |
| ·PCR引物设计 | 第49-51页 |
| ·从辣根总RNA中钓取hrp | 第51-52页 |
| ·PCR扩增hrp | 第52页 |
| ·定点突变删除hrp中的EcoRI酶切位点 | 第52-54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-57页 |
| 5.hrp转化E.coli TOP10 | 第57-65页 |
| ·pPICZα-A-hrp重组质粒的构建 | 第57-59页 |
| ·pPICZα-A-hrp重组质粒转化E.coli TOP10 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-65页 |
| 6.本章小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 第三章 hrp在Pichia pastoris GS115酵母中的表达 | 第68-88页 |
| 1.前言 | 第68-70页 |
| 2.试剂与仪器 | 第70-73页 |
| 3.方法 | 第73-77页 |
| ·pPICZα-A-hrp融合质粒的提取 | 第73页 |
| ·融合质粒pPICZα-A-hrp的线性化反应 | 第73-74页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第74页 |
| ·转化反应 | 第74-75页 |
| ·Pichia总DNA提取 | 第75-76页 |
| ·Pichia pastoris GS115突变表型检测 | 第76页 |
| ·HRP在Pichia pastoriS GS115中的表达 | 第76页 |
| ·PCR法分析检测转化子 | 第76-77页 |
| ·双酶切分析 | 第77页 |
| ·HRP活性检测 | 第77页 |
| 4.结果与讨论 | 第77-83页 |
| ·pPICZα-A-hrp融合质粒的提取 | 第77-78页 |
| ·融合质粒pPICZα-A-hrp的线性化 | 第78-79页 |
| ·Pichia pastoris转化反应 | 第79-83页 |
| 5.结论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-88页 |
| 第四章 HRP的体外定向进化--提高HRP的H_2O_2耐受性 | 第88-112页 |
| 1.引言 | 第88-89页 |
| 2.试剂与仪器 | 第89-91页 |
| 3.方法 | 第91-98页 |
| ·第一轮突变hrp文库的构建 | 第92-93页 |
| ·第二轮突变hrp文库的构建 | 第93-95页 |
| ·突变hrp表达文库的构建 | 第95-96页 |
| ·定向筛选 | 第96-97页 |
| ·突变表型鉴定 | 第97页 |
| ·HRP在Pichia pastoris GS115中的表达 | 第97-98页 |
| ·HRP催化对苯二胺聚合反应 | 第98页 |
| 4.结果与讨论 | 第98-107页 |
| ·第一轮进化 | 第98-102页 |
| ·第二轮进化 | 第102-106页 |
| ·HRP17-32催化对苯二胺聚合反应 | 第106-107页 |
| 5.结论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-112页 |
| 第五章 HRP17-32在Pichia pastorisGS/115中的高效表达及分离纯化 | 第112-124页 |
| 1.前言 | 第112页 |
| 2.试剂和仪器 | 第112-113页 |
| 3.方法 | 第113-116页 |
| ·进化HRP17-32在Pichia pastorisGS/115中的诱导表达 | 第113页 |
| ·HRP17-32诱导表达及产酶条件研究 | 第113-114页 |
| ·毕赤酵母高效表达进化HRP17-32 | 第114-115页 |
| ·HRP17-32的分离纯化 | 第115-116页 |
| 4.结果与讨论 | 第116-119页 |
| ·毕赤酵母的诱导生长及产酶活性 | 第116-117页 |
| ·发酵液pH值对HRP17-32表达的影响 | 第117页 |
| ·发酵液中甲醇浓度对HRP17-32表达活性的影响 | 第117-118页 |
| ·分离纯化 | 第118-119页 |
| 5.结论 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-124页 |
| 第六章 进化HRP17-32催化对苯二胺聚合反应部分性质研究及聚合物表征 | 第124-142页 |
| 1.前言 | 第124页 |
| 2.试剂与仪器 | 第124-125页 |
| 3.方法 | 第125-129页 |
| ·进化HRP17-32催化对苯二胺聚合反应 | 第125页 |
| ·进化HRP17-32催化氧化对苯二胺反应动力学 | 第125-126页 |
| ·进化HRP17-32催化氧化对苯二胺反应稳定性研究 | 第126-127页 |
| ·酶促反应速度及酶活性测定 | 第127-128页 |
| ·聚合物的表征 | 第128-129页 |
| 4.结果与讨论 | 第129-138页 |
| ·进化的HRP催化氧化对苯二胺反应动力学研究 | 第129-132页 |
| ·进化HRP17-32催化氧化对苯二胺反应稳定性研究 | 第132-136页 |
| ·聚合物的表征 | 第136-138页 |
| 5.结论 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-142页 |
| 第七章 进化HRP17-32催化对苯二胺-丙烯酸聚合反应及聚合物的表征 | 第142-159页 |
| 1.前言 | 第142页 |
| 2.试剂与仪器 | 第142-143页 |
| 3.方法 | 第143-145页 |
| ·进化HRP17-32催化对苯二胺-丙烯酸聚合反应 | 第143页 |
| ·聚合物产率计算 | 第143页 |
| ·H_2O_2浓度对酶催化聚对苯二胺-丙烯酸合成的影响 | 第143-144页 |
| ·pH值对酶催化聚对苯二胺-丙烯酸合成的影响 | 第144页 |
| ·丙烯酸/对苯二胺比率对聚合物合成的影响 | 第144页 |
| ·聚合反应时间对酶催化聚对苯二胺-丙烯酸合成的影响 | 第144页 |
| ·聚合物的表征 | 第144-145页 |
| 4.结果与讨论 | 第145-154页 |
| ·进化HRP17-32催化对苯二胺-丙烯酸聚合反应 | 第145-149页 |
| ·聚合物的结构表怔 | 第149-154页 |
| 5.结论 | 第154-156页 |
| 参考文献 | 第156-159页 |
| 读博士期间发表的文章和成果 | 第159-162页 |
| 致谢 | 第162页 |
