| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| ·A.ferrooxidans菌亚铁氧化系统介绍 | 第11-18页 |
| ·铜蓝蛋白(Rusticyanin) | 第13-14页 |
| ·亚铁氧化酶(Iron oxidase) | 第14-16页 |
| ·细胞色素Cyc2,Cyc1和细胞色素氧化酶 | 第16-18页 |
| ·铁硫簇组装机理 | 第18-22页 |
| ·铁硫簇组装蛋白IscA(Iron Sulfur Cluster Assembly protein A) | 第18-20页 |
| ·铁硫簇组装蛋白IscU,IscS,IscR | 第20-21页 |
| ·铁硫簇组装机理 | 第21-22页 |
| ·课题的研究目的与研究内容 | 第22-24页 |
| ·依据和目的 | 第22页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第22-23页 |
| ·论文课题受资助情况 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·A.ferrooxidans菌基因组抽提试剂 | 第25页 |
| ·质粒提取试剂 | 第25页 |
| ·不连续体系SDS-PAGE电泳 | 第25-26页 |
| ·SDS-PAGE胶保存试剂及装置 | 第26页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·酶切PCR产物及载体pLM1 | 第28页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第28-29页 |
| ·蛋白质表达转化 | 第29页 |
| ·蛋白质的条件表达 | 第29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29-31页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第31页 |
| ·定点突变 | 第31-33页 |
| ·引物的设计 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第33页 |
| ·突变蛋白质的表达及纯化 | 第33页 |
| ·测试分析方法 | 第33-35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第33页 |
| ·紫外分光光度计(UV Scanning) | 第33页 |
| ·电子顺磁共振(EPR) | 第33-34页 |
| ·基质辅助激光解吸串联分行时间质谱(MALDI-TOF) | 第34-35页 |
| 第三章 铜蓝蛋白的克隆、表达、纯化及C138、H85、H143定点突变 | 第35-44页 |
| ·铜蓝蛋白基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·铜蓝蛋白基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第36-37页 |
| ·铜蓝蛋白的表达 | 第37-41页 |
| ·铜蓝蛋白表达条件的确定 | 第37页 |
| ·铜蓝蛋白大规模的表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE分析铜蓝蛋白 | 第37-38页 |
| ·UV/Vis分析铜蓝蛋白 | 第38-39页 |
| ·电子顺磁共振波谱(EPR)分析铜蓝蛋白 | 第39页 |
| ·分子模拟铜蓝蛋白 | 第39-41页 |
| ·铜蓝蛋白C138、H85、H143定点突变 | 第41-43页 |
| ·铜蓝蛋白定点突变 | 第41页 |
| ·突变蛋白质的表达、纯化 | 第41-42页 |
| ·突变蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第42页 |
| ·UV/Vis分析突变蛋白 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 亚铁氧化酶的克隆、表达、纯化及Y10定点突变 | 第44-54页 |
| ·亚铁氧化酶(Iron Oxidase,IRO)的克隆 | 第44-46页 |
| ·IRO基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第45-46页 |
| ·亚铁氧化酶的表达 | 第46-51页 |
| ·亚铁氧化酶蛋白表达条件的确定 | 第46页 |
| ·亚铁氧化酶大规模的表达 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE分析纯化的样品 | 第46-47页 |
| ·基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF) | 第47-48页 |
| ·紫外扫描(UV/vis) | 第48页 |
| ·电子顺磁共振波谱(EPR) | 第48-49页 |
| ·亚铁氧化酶分子结构模拟 | 第49-51页 |
| ·亚铁氧化酶Y10定点突变 | 第51-53页 |
| ·亚铁氧化酶Y10的定点突变 | 第51页 |
| ·突变蛋白质的表达、纯化 | 第51页 |
| ·突变蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第51-52页 |
| ·UV/Vis分析突变蛋白 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 铁硫簇组装蛋白A(Iron Sulfur Cluster Assembly proteinA, IscA)的克隆、表达、纯化及定点突变 | 第54-63页 |
| ·IscA蛋白的克隆 | 第54-55页 |
| ·IscA基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第55页 |
| ·IscA蛋白的表达 | 第55-56页 |
| ·Isc蛋白表达条件的确定 | 第55-56页 |
| ·IscA蛋白大规模的表达 | 第56页 |
| ·IscA蛋白的分析 | 第56-60页 |
| ·SDS-PAGE分析纯化的样品 | 第56-57页 |
| ·UV/Vis分析IscA蛋白 | 第57页 |
| ·电子顺磁共振波谱(EPR)分析IscA蛋白 | 第57-58页 |
| ·基质辅助激光解吸-飞行时间质谱(MALDI-TOF)分析IscA | 第58页 |
| ·分子模拟IscA蛋白结构 | 第58-60页 |
| ·IscA蛋白的定点突变 | 第60-62页 |
| ·IscA蛋白三个保守的半胱氨酸的定点突变 | 第60-61页 |
| ·突变蛋白质的表达、纯化 | 第61页 |
| ·突变蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第61页 |
| ·UV/Vis分析突变蛋白 | 第61-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第六章 铁硫簇体外组装机理的初步研究 | 第63-68页 |
| ·Apo-形式蛋白质的准备 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·蛋白质去铁硫簇 | 第63页 |
| ·铁硫簇的组装 | 第63页 |
| ·UV/Vis测定Apo-及Holo-形式蛋白性质 | 第63-65页 |
| ·MALDI-MS分析铁硫簇的组装结果 | 第65-66页 |
| ·铁硫簇的组装流程模型 | 第66-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 第七章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 研究成果 | 第79页 |
