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Rapamycin对同种移植耐受模型中CD4~+ CD25~+调节性T细胞活性影响的实验研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-12页
符号说明第12-14页
一、前言第14-18页
二、实验材料和方法第18-28页
 (一) 实验材料第18-21页
  1.建立小鼠同种皮肤移植模型的相关实验材料第18页
  2.制备小鼠脾细胞及纯化T细胞和CD4~+ T细胞的实验材料第18页
  3.混合淋巴细胞反应(~3H—TdR掺入法)的实验材料第18-19页
  4.细胞总RNA提取的实验材料第19-20页
  5.RT反应的实验材料第20页
  6.PCR反应的实验材料第20页
  7.DAN电泳的实验材料第20-21页
  8.流式细胞术所用实验材料第21页
  9.测定LI-10的实验材料及仪器第21页
  10.实验用药物第21页
 (二) 实验方法第21-28页
  1.小鼠同种皮肤移植模型的制备第21-22页
  2.CD4~+T细胞介导的SCID小鼠同种皮肤移植模型制备第22页
  3.同种移植模型的耐受诱导及分组第22页
  4.皮肤移植物排斥的组织学鉴定第22页
  5.制备脾T细胞和CD4~+T细胞的实验方法第22-23页
  6.脾CD4~+T细胞和T细胞体外培养第23页
  7.流式细胞术测定CD4~+CD25~+T细胞比例第23-24页
  8.混合淋巴细胞反应(~3H—TdR掺入法)第24页
  9.TRIzol一步法提取细胞总RNA第24-25页
  10.RT-PCR第25-26页
  11.PCR产物琼脂糖凝胶电泳第26-27页
  12.ELISA法测定IL-10第27页
  13.过继转移实验第27页
  14.统计学分析第27-28页
三、实验结果第28-40页
 (一) 体内实验结果第28-31页
  1.移植皮片存活曲线第28页
  2.移植皮片排斥状况及小鼠一般状况第28-30页
  3.小鼠同种移植后移植皮片的组织学鉴定第30-31页
 (二) 体外实验结果第31-37页
  1.流式细胞术检测CD4~+CD25~+T细胞比例第31-34页
  2.混合淋巴细胞反应检测T细胞特异性增殖水平第34-35页
  3.ELISA检测IL-10水平第35-36页
  4.RT-PCR检测Foxp3表达状况第36-37页
 (三) 过继免疫反应实验结果第37-40页
  1.过继输入CsA组CD4~+T细胞后移植皮片存活情况第37-38页
  2.过继输入雷帕霉素组CD4~+T细胞后移植皮片存活情况第38-40页
四、讨论第40-49页
 1.诱导模型耐受的药物选择第41页
 2.Rapa体外作用对耐受模型CD4~+CD25~+调节性T细胞影响第41-46页
 3.过继转移实验第46-49页
五、小结第49-50页
六、参考文献第50-57页
七、致谢第57-58页
八、攻读硕士期间发表的学术论文目录第58-59页
学位论文评阅及答辩情况表第59页

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