| 主要缩略词表 | 第9-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 引言 | 第15-18页 |
| 第一部分 心肌重构细胞模型的建立及坎离颗粒的干预作用 | 第18-44页 |
| 实验一 心肌重构细胞模型的建立 | 第18-33页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| 1.1 实验细胞 | 第18页 |
| 1.2 实验药物 | 第18页 |
| 1.3 实验试剂与材料 | 第18-19页 |
| 1.3.1 实验试剂 | 第18-19页 |
| 1.3.2 实验材料 | 第19页 |
| 1.4 实验仪器和设备 | 第19-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.1 主要试剂配制 | 第20页 |
| 2.1.1 细胞培养基配制 | 第20页 |
| 2.1.2 AngⅡ母液配制 | 第20页 |
| 2.2 实验药物配制方案 | 第20页 |
| 2.3 H9c2细胞培养方法 | 第20-22页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第21页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第21页 |
| 2.3.3 细胞传代 | 第21页 |
| 2.3.4 细胞冻存 | 第21-22页 |
| 2.4 应用AngⅡ造模最佳用药时间测定 | 第22页 |
| 2.4.1 细胞分组用药后收集蛋白 | 第22页 |
| 2.4.2 细胞爬片后免疫荧光 | 第22页 |
| 2.5 观察指标检测方法 | 第22-25页 |
| 2.5.1 H9c2细胞内蛋白表达量检测 | 第22-24页 |
| 2.5.2 蛋白图像分析 | 第24页 |
| 2.5.3 观察细胞形态变化 | 第24-25页 |
| 2.6 统计方法 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-33页 |
| 3.1 细胞复苏及传代培养 | 第25-26页 |
| 3.2 血管紧张素诱导心肌细胞重构的最佳时间确定 | 第26-33页 |
| 3.2.1 细胞病理形态改变 | 第26-27页 |
| 3.2.2 AngⅡ对心肌细胞重构的影响 | 第27-33页 |
| 实验二 坎离颗粒对心肌重构的干预作用 | 第33-44页 |
| 1 材料 | 第33页 |
| 1.1 实验细胞 | 第33页 |
| 1.2 实验药物 | 第33页 |
| 1.3 实验试剂与材料 | 第33页 |
| 1.4 实验仪器和设备 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-36页 |
| 2.1 主要实验试剂配制 | 第33-35页 |
| 2.2 坎离颗粒对H9c2细胞毒性检测方法 | 第35-36页 |
| 2.3 观察指标检测方法 | 第36页 |
| 2.4 统计方法 | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-44页 |
| 3.1 坎离颗粒网络药理学预测结果 | 第36页 |
| 3.2 坎离颗粒实验用药浓度 | 第36-37页 |
| 3.3 坎离颗粒对H9c2细胞心肌重构的干预作用 | 第37-44页 |
| 第二部分 Runx2基因敲除与过表达细胞模型的建立及坎离颗粒的干预作用 | 第44-60页 |
| 实验一 Runx2基因敲除细胞模型的建立 | 第44-54页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1 实验细胞 | 第44页 |
| 1.2 实验试剂与载体 | 第44-45页 |
| 1.2.1 实验试剂 | 第44-45页 |
| 1.2.2 载体信息:PGMLV-GM1 | 第45页 |
| 1.3 实验设备和仪器 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-49页 |
| 2.1 Runx2 g RNA-CRISPR/Cas9 载体构建 | 第45-47页 |
| 2.1.1 gRNA靶位点的选择 | 第45-46页 |
| 2.1.2 gRNA引物的设计 | 第46页 |
| 2.1.3 gRNA重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| 2.2 慢病毒包装和病毒滴度测定 | 第47-49页 |
| 2.2.1 慢病毒包装 | 第47-48页 |
| 2.2.2 Lentivirus滴度测定 | 第48页 |
| 2.2.3 总RNA抽提 | 第48-49页 |
| 2.2.4 反转录成cDNA | 第49页 |
| 2.2.5 Real-time PCR检测 | 第49页 |
| 2.3 筛选稳转细胞株 | 第49页 |
| 2.4 统计方法 | 第49页 |
| 3.结果 | 第49-54页 |
| 3.1 测序结果 | 第50-52页 |
| 3.2 病毒滴度测定结果 | 第52页 |
| 3.3 Runx2基因敲除效率 | 第52-54页 |
| 实验二 Runx2基因过表达细胞模型的建立 | 第54-60页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| 1.1 实验细胞 | 第54页 |
| 1.2 实验试剂与载体 | 第54-55页 |
| 1.2.1 实验试剂 | 第54-55页 |
| 1.2.2 载体信息 | 第55页 |
| 1.3 实验设备和仪器 | 第55页 |
| 2.方法 | 第55-57页 |
| 2.1 H9c2过表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 2.1.1 设计并合成引物 | 第55页 |
| 2.1.2 载体双酶切 | 第55-56页 |
| 2.1.3 目的片段的扩增 | 第56页 |
| 2.1.4 过表达载体与目的片段的连接(无缝克隆) | 第56页 |
| 2.1.5 转化 | 第56页 |
| 2.1.6 送测 | 第56页 |
| 2.2 慢病毒包装和病毒滴度的测定 | 第56-57页 |
| 2.3 筛选稳转细胞株 | 第57页 |
| 2.4 统计方法 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-59页 |
| 3.1 测序结果 | 第57-58页 |
| 3.2 病毒滴度测定结果 | 第58-59页 |
| 3.3 Runx2基因过表达效率 | 第59页 |
| 4.小结 | 第59-60页 |
| 第三部分 Runx2基因编辑对心肌重构的影响及坎离颗粒的干预作用 | 第60-71页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| 1.1 实验细胞 | 第60页 |
| 1.2 实验药物 | 第60页 |
| 1.3 实验试剂与材料 | 第60页 |
| 1.4 实验仪器和设备 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60页 |
| 2.1 主要实验试剂配制 | 第60页 |
| 2.2 观察指标检测方法 | 第60页 |
| 2.3 统计方法 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-71页 |
| 3.1 .心肌重构关键指标BNP蛋白表达变化 | 第61-63页 |
| 3.2 心肌重构关键指标MMP-1的蛋白表达变化 | 第63-64页 |
| 3.3 心肌重构关键指标MMP-9的蛋白表达变化 | 第64-66页 |
| 3.4 心肌重构关键指标TIMP-1的蛋白表达变化 | 第66-67页 |
| 3.5 心肌重构关键指标Runx2的蛋白表达变化 | 第67-68页 |
| 3.6 Runx2基因敲除后相关指标蛋白表达变化 | 第68-69页 |
| 3.7 Runx2基因过表达后相关指标蛋白表达变化 | 第69页 |
| 3.8 MMP-9/TIMP-1 比率 | 第69-71页 |
| 讨论 | 第71-79页 |
| 1 心肌重构是CHF发生发展的病理基础 | 第71页 |
| 2 中医对CHF的认识与研究 | 第71-72页 |
| 3 坎离颗粒的组方意义 | 第72-73页 |
| 4 坎离颗粒对心肌重构的干预作用 | 第73-76页 |
| 5 Runx2对心肌重构的影响 | 第76-78页 |
| 6 坎离颗粒对Runx2的影响 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 附件 | 第92-97页 |
