| 本文主要英文缩写词 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-30页 |
| 1 对虾白斑综合征研究进展 | 第14-23页 |
| ·WSS的症状 | 第14-15页 |
| ·WSSV的感染宿主、感染途径及动物模型 | 第15-16页 |
| ·WSSV的形态结构及理化特性 | 第16-17页 |
| ·WSSV分子生物学进展 | 第17-19页 |
| ·WSS的诊断 | 第19-21页 |
| ·对虾白斑综合征病毒的防治研究 | 第21-23页 |
| 2 甲壳动物的免疫反应 | 第23-25页 |
| ·细胞免疫 | 第23-24页 |
| ·体液免疫 | 第24-25页 |
| 3 杆状病毒表达系统 | 第25-29页 |
| ·杆状病毒表达系统的原理 | 第25页 |
| ·杆状病毒表达系统的发展 | 第25-27页 |
| ·杆状病毒表达系统的优缺点 | 第27-28页 |
| ·杆状病毒表达系统的应用 | 第28-29页 |
| 4 本论文的研究目的和意义 | 第29-30页 |
| 第二篇 对虾白斑综合征病毒的分离纯化 | 第30-43页 |
| 1 试验材料 | 第30-32页 |
| ·种毒来源 | 第30-31页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·培养基及主要化学试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·其它材料 | 第32页 |
| 2 试验方法 | 第32-37页 |
| ·种毒处理 | 第32页 |
| ·病毒在螯虾体内的增殖 | 第32-33页 |
| ·螯虾鳃组织基因组提取 | 第33页 |
| ·引物设计(检测用) | 第33页 |
| ·PCR反应体系和条件 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的凝胶电泳 | 第34页 |
| ·病毒的分离纯化 | 第34-35页 |
| ·电镜观察 | 第35页 |
| ·病毒的结构蛋白SDS-PAGE分析 | 第35-37页 |
| 3 试验结果 | 第37-40页 |
| ·螯虾接种后的临床症状 | 第37页 |
| ·PCR检测结果 | 第37页 |
| ·纯化病毒粒子的形态学观察 | 第37-39页 |
| ·纯化病毒的SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·WSSV的增殖 | 第40-41页 |
| ·WSSV的分离纯化 | 第41页 |
| ·WSSV病毒粒子的形态观察和结构蛋白分析 | 第41-43页 |
| 第三篇 对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第43-62页 |
| 1 基因克隆及表达策略 | 第44-46页 |
| ·基因克隆策略 | 第44-45页 |
| ·基因表达策略 | 第45-46页 |
| 2 试验材料 | 第46-48页 |
| ·病毒 | 第46页 |
| ·菌种和质粒 | 第46页 |
| ·引物设计: | 第46页 |
| ·培养基及主要化学试剂的配制 | 第46-47页 |
| ·其他试剂 | 第47-48页 |
| 3 试验方法 | 第48-53页 |
| ·WSSV基因组提取 | 第48页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第48页 |
| ·DNA电泳 | 第48页 |
| ·目的片段的割胶回收 | 第48-49页 |
| ·DNA片段与T载体连接 | 第49页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·连接产物转化 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第50页 |
| ·测序 | 第50页 |
| ·重组克隆质粒和表达载体酶切 | 第50页 |
| ·目的片段与表达载体连接 | 第50-51页 |
| ·连接产物转化表达宿主菌 | 第51页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第51页 |
| ·阳性表达子的诱导表达 | 第51页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第51页 |
| ·表达产物的Western blot分析 | 第51-52页 |
| ·表达产物的纯化 | 第52-53页 |
| 4 试验结果 | 第53-60页 |
| ·VP28基因的克隆 | 第53-54页 |
| ·VP28核苷酸序列分析 | 第54-58页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测和产物的Western blot分析 | 第58-59页 |
| ·表达产物的纯化 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-62页 |
| ·VP28基因克隆及分析 | 第60页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第60-61页 |
| ·VP28基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第61-62页 |
| 第四篇 对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因在昆虫细胞中的表达 | 第62-74页 |
| 1 试验材料 | 第63-64页 |
| ·菌种和质粒 | 第63页 |
| ·引物设计 | 第63页 |
| ·培养基及主要化学试剂的配制 | 第63-64页 |
| ·其他试剂 | 第64页 |
| 2 试验方法 | 第64-70页 |
| ·VP28基因克隆及重组质粒构建 | 第64页 |
| ·重组转移载体质粒pFastBac-VP28的构建策略 | 第64-66页 |
| ·重组杆状病毒构建及目的基因表达 | 第66-70页 |
| 3 试验结果 | 第70-72页 |
| ·VP28基因的克隆 | 第70-71页 |
| ·重组Bacmid-VP28感染Sf9细胞 | 第71页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE及Western blot分析 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| ·Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第72-73页 |
| ·VP28基因在Sf9细胞中的表达 | 第73-74页 |
| 第五篇 高温对WSSV在螯虾体内增殖的影响 | 第74-83页 |
| 1 试验材料 | 第75页 |
| ·试验动物、病毒、菌种和质粒 | 第75页 |
| ·其他材料 | 第75页 |
| 2 试验方法 | 第75-78页 |
| ·WSSV感染浓度体内滴定 | 第75页 |
| ·水温对WSSV口服感染螯虾的影响 | 第75页 |
| ·高水温对WSSV感染螯虾的影响 | 第75-76页 |
| ·高水温对WSSV增殖的影响 | 第76页 |
| ·竞争性PCR内标的构建 | 第76-77页 |
| ·竞争性PCR检测 | 第77页 |
| ·数据分析 | 第77-78页 |
| 3 试验结果 | 第78-81页 |
| ·病毒体内滴定 | 第78页 |
| ·水温对WSSV感染螯虾的影响 | 第78-79页 |
| ·高水温对WSSV感染螯虾的影响 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-83页 |
| ·温度对WSSV感染的影响 | 第81-82页 |
| ·高温对WSSV增殖的影响 | 第82-83页 |
| 第六篇 重组VP28蛋白的抗病性比较 | 第83-90页 |
| 1 试验材料 | 第84页 |
| ·试验动物、纯化病毒液 | 第84页 |
| ·重组VP28蛋白 | 第84页 |
| ·其他材料 | 第84页 |
| 2 试验方法 | 第84-85页 |
| ·重组VP28蛋白定量 | 第84页 |
| ·注射用VP28蛋白处理 | 第84页 |
| ·螯虾体内保护性试验 | 第84-85页 |
| ·数据分析 | 第85页 |
| 3 试验结果 | 第85-87页 |
| ·重组VP28蛋白浓度 | 第85页 |
| ·螯虾体内保护性试验 | 第85-87页 |
| 4 讨论 | 第87-90页 |
| 第七篇 论文提示及今后需要进一步研究的问题 | 第90-93页 |
| 1 提示 | 第90-91页 |
| 2 今后需进一步研究的问题 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 附录一 pUCm-T Vector | 第103-104页 |
| 附录二 pET-30a(+) Vector | 第104-105页 |
| 附录三 pFastBac~(TM)HTA | 第105-106页 |
| 攻读博士学位期间发表的与学位论文相关的文章 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
