| 第一章 综述 | 第1-24页 |
| ·PTD-Tat 的研究概况 | 第9-18页 |
| ·背景简介 | 第9-10页 |
| ·Tat 蛋白转导域(PTD-Tat) | 第10-11页 |
| ·PTD-Tat 的结构特征 | 第11-13页 |
| ·跨膜递送机制的研究 | 第13-15页 |
| ·PTD-TAT 的应用 | 第15-17页 |
| ·研究前景展望 | 第17-18页 |
| ·绿色荧光蛋白(green fluorescent ptotein,GFP) | 第18-22页 |
| ·GFP 的研究进展 | 第18-21页 |
| ·GFP 的发展史 | 第18页 |
| ·GFP 的结构、生化及光谱特性 | 第18-20页 |
| ·GFP 的改进 | 第20-21页 |
| ·GFP 应用 | 第21-22页 |
| ·筛选标记 | 第21页 |
| ·实时定位标记 | 第21-22页 |
| ·免疫学标记 | 第22页 |
| ·问题与展望 | 第22页 |
| ·本课题的研究思路及其研究意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-42页 |
| ·实验流程 | 第24-25页 |
| ·实验试剂和材料 | 第25-28页 |
| ·质粒、菌株、细胞株和动物 | 第25页 |
| ·主要药品和试剂 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第27-28页 |
| ·主要使用仪器 | 第28页 |
| ·表达质粒pGEX-GFP-Tat 的构建 | 第28-32页 |
| ·基因片断的扩增 | 第28-30页 |
| ·引物的设计与合成 | 第29页 |
| ·PCR 扩增 | 第29页 |
| ·扩增产物的回收 | 第29-30页 |
| ·质粒载体pUCm-GFP-Tat 的构建 | 第30-31页 |
| ·目的基因片断与pUCm-T 载体的连接 | 第30页 |
| ·pUCm-GFP-Tat 质粒转化感受态大肠杆菌 DH5α | 第30页 |
| ·含有质粒pUCm-GFP-Tat 阳性克隆的筛选 | 第30-31页 |
| ·蓝白筛选原理——α互补 | 第30页 |
| ·质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·GFP-Tat 的回收 | 第31页 |
| ·表达载体pGEX-GFP-Tat 的构建 | 第31-32页 |
| ·GFP-Tat 与质粒pGEX-2T 的连接 | 第31页 |
| ·pGEX-GFP-Tat 转化感受态大肠杆菌BL21(DE3) | 第31页 |
| ·表达菌株的筛选鉴定 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白GST-GFP-Tat 的表达、纯化与分析 | 第32-37页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第32-33页 |
| ·原理 | 第32页 |
| ·溶液配制 | 第32-33页 |
| ·实验步骤 | 第33页 |
| ·融合蛋白GST-GFP-Tat 的表达 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白大量表达 | 第34页 |
| ·谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白GST-GFP-Tat | 第34-35页 |
| ·亲和纯化的原理 | 第34页 |
| ·实验步骤 | 第34-35页 |
| ·GST-GFP-Tat 的浓度测定——Folin–酚试剂法 | 第35-36页 |
| ·原理 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第35页 |
| ·样品测定 | 第35-36页 |
| ·Western blotting 鉴定 | 第36-37页 |
| ·原理 | 第36页 |
| ·材料与试剂 | 第36页 |
| ·电泳转移装置 | 第36-37页 |
| ·实验步骤 | 第37页 |
| ·GST-GFP-Tat 荧光学特性研究 | 第37页 |
| ·跨膜递送作用的研究 | 第37-42页 |
| ·体外培养细胞的跨膜活性 | 第37-40页 |
| ·跨膜活性的检测 | 第38页 |
| ·细胞的培养 | 第38页 |
| ·跨膜活性的定性分析——荧光显微镜 | 第38页 |
| ·跨膜活性的定量分析——流式细胞计数仪(FACS) | 第38页 |
| ·GST-GFP-Tat 跨膜递送的动力学研究 | 第38-39页 |
| ·浓度的影响 | 第38页 |
| ·时间的影响 | 第38页 |
| ·温度的影响 | 第38-39页 |
| ·影响GST-GFP-Tat 跨膜递送的其他因素 | 第39页 |
| ·GST-GFP-Tat 对细胞的毒性研究 | 第39-40页 |
| ·GST-GFP-Tat 对细胞膜完整性的影响 | 第39页 |
| ·GST-GFP-Tat 对细胞的毒性测定 | 第39-40页 |
| ·小鼠体内的跨膜活性 | 第40页 |
| ·皮肤涂抹实验 | 第40页 |
| ·腹腔注射 | 第40页 |
| ·GST-GFP-Tat 对线虫的影响 | 第40页 |
| ·线虫实验 | 第40页 |
| ·与GFP 以转染方式作用于线虫的结果比对 | 第40页 |
| ·PTD-Tat 之C 端融合的跨膜活性与N 端融合的比较 | 第40-42页 |
| ·细胞的跨膜活性对比 | 第40-41页 |
| ·定性比较 | 第40-41页 |
| ·定量比较 | 第41页 |
| ·小鼠活体实验比对 | 第41页 |
| ·GFP-Tat 与Tat-GFP 的结构模拟 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第42-63页 |
| ·模型蛋白GST-GFP-Tat 的构建 | 第42-45页 |
| ·目的基因的克隆与亚克隆 | 第42-44页 |
| ·表达质粒pGEX-GFP-Tat 的构建 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白GST-GFP-Tat 的表达、纯化及荧光特性分析 | 第45-48页 |
| ·融合蛋白 GST-GFP-Tat 的表达 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白GST-GFP-Tat 的大量表达 | 第46页 |
| ·GS-48 亲和纯化融合蛋白GST-GFP-Tat | 第46-47页 |
| ·GST-GFP-Tat 的荧光学特性 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白GST-GFP-Tat 跨膜递送作用 | 第48-63页 |
| ·在体外培养细胞中的跨膜活性 | 第48-55页 |
| ·GST-GFP-Tat 跨膜递送的动力学研究 | 第48-51页 |
| ·影响 GST-GFP-Tat 跨膜递送的其他因素 | 第51-54页 |
| ·GST-GFP-Tat 对细胞的毒性研究 | 第54-55页 |
| ·GST-GFP-Tat 对细胞膜完整性的影响 | 第54页 |
| ·GST-GFP-Tat 对细胞的毒性测定 | 第54-55页 |
| ·小鼠体内的跨膜活性 | 第55-57页 |
| ·皮肤涂抹实验 | 第55-57页 |
| ·腹腔注射 | 第57页 |
| ·GST-GFP-Tat 对线虫的影响 | 第57-60页 |
| ·PTD-Tat 之C 端融合的跨膜活性与N 端融合的比较 | 第60-63页 |
| ·细胞的跨膜活性对比 | 第60页 |
| ·小鼠活体实验比对 | 第60-62页 |
| ·GFP-Tat 与Tat-GFP 的结构模拟 | 第62-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| ·展望 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 附录 | 第75-80页 |
| 1 GFP-Tat 的序列比对 | 第75-78页 |
| 2 测序彩图 | 第78-80页 |
| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的学术论文 | 第80页 |
