| 符号说明 | 第1-14页 |
| 中文摘要 | 第14-17页 |
| Abstract | 第17-20页 |
| 第一章 前 言 | 第20-36页 |
| 1 胸膜肺炎放线杆菌病原分子生物学研究 | 第20-27页 |
| 2.猪胸膜肺炎流行病学研究 | 第27-29页 |
| 3.猪胸膜肺炎放线杆菌诊断方法的研究 | 第29-32页 |
| 4.猪传染性胸膜肺炎免疫预防研究 | 第32-36页 |
| 第二章 猪胸膜肺炎放线杆菌 PCR 诊断方法的建立与应用 | 第36-47页 |
| 1 材料和方法 | 第37-43页 |
| ·仪器和试剂 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·PCR 引物 | 第37页 |
| ·细菌培养基 | 第37-38页 |
| ·病料 | 第38页 |
| ·模板的制备 | 第38页 |
| ·PCR 反应条件 | 第38-39页 |
| ·PCR 扩增产物的检测 | 第39页 |
| ·PCR 产物的克隆及序列测定 | 第39-42页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第39-40页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第40页 |
| ·BL21 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40-41页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第41-42页 |
| ·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第42页 |
| ·阳性克隆序列测定 | 第42页 |
| ·PCR 检测的特异性试验 | 第42-43页 |
| ·PCR 检测的敏感性试验 | 第43页 |
| ·PCR 对分离菌株的检测 | 第43页 |
| ·PCR 对感染猪病变组织的检测 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-45页 |
| ·PCR 检测的特异性试验 | 第43-44页 |
| ·PCR 检测的敏感性试验 | 第44页 |
| ·PCR 产物的克隆和序列测定 | 第44页 |
| ·PCR 对分离菌株的检测 | 第44-45页 |
| ·PCR 对感染病变组织的检测 | 第45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 地高辛标记探针检测猪胸膜肺炎放线杆菌的研究与应用 | 第47-55页 |
| 1 材料和方法 | 第48-51页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·仪器和试剂 | 第48页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·PCR 引物 | 第48页 |
| ·细菌培养基 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·ApxⅣ基因的克隆和序列测定 | 第49页 |
| ·APP 基因组的提取及模板的制备 | 第49页 |
| ·PCR 反应 | 第49页 |
| ·PCR 产物的克隆及序列测定 | 第49页 |
| ·探针的标记 | 第49-50页 |
| ·杂交检测程序 | 第50-51页 |
| ·标记探针的特异性试验 | 第51页 |
| ·标记探针的敏感性试验 | 第51页 |
| ·标记探针对分离菌株的检测 | 第51页 |
| ·标记探针对临床病例病变组织的检测 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-54页 |
| ·PCR 结果 | 第51-52页 |
| ·PCR 产物的克隆和序列测定 | 第52页 |
| ·标记探针的特异性试验 | 第52页 |
| ·标记探针的敏感性试验 | 第52-53页 |
| ·标记探针对分离菌株的检测 | 第53页 |
| ·标记探针对感染病变组织的检测 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 猪胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验 | 第55-65页 |
| 1 材料和方法 | 第55-56页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·仪器和试剂 | 第55页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·细菌培养基 | 第55-56页 |
| ·病料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56页 |
| ·病原的分离鉴定 | 第56页 |
| ·生化特性 | 第56页 |
| ·PCR 检测 | 第56页 |
| ·药敏试验 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-64页 |
| ·病理变化 | 第56-61页 |
| ·培养特性 | 第61页 |
| ·染色镜检 | 第61页 |
| ·生化试验结果 | 第61页 |
| ·PCR 鉴定结果 | 第61-62页 |
| ·药敏试验结果 | 第62-64页 |
| 3 讨论 | 第64-65页 |
| 第五章 猪胸膜肺炎放线杆菌山东分离株的血清型与 APX 毒素型研究 | 第65-79页 |
| 1 材料和方法 | 第66-68页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·仪器和试剂 | 第66页 |
| ·实验动物 | 第66页 |
| ·菌株 | 第66页 |
| ·不同血清型胸膜肺炎放线杆菌阳性血清 | 第66页 |
| ·PCR 引物 | 第66-67页 |
| ·细菌培养基 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-68页 |
| ·血清型鉴定 | 第67页 |
| ·Apx 毒素型鉴定 | 第67-68页 |
| ·APP 基因组的提取及模板的制备 | 第67-68页 |
| ·PCR 反应 | 第68页 |
| ·PCR 产物的克隆及序列测定 | 第68页 |
| ·致病性试验 | 第68页 |
| 2 结果 | 第68-77页 |
| ·血清型鉴定结果 | 第68-70页 |
| ·分离菌株毒素型鉴定结果 | 第70-72页 |
| ·分离菌株毒素基因测序结果 | 第72页 |
| ·致病性试验结果 | 第72-77页 |
| 3 讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 猪传染性胸膜肺炎病料中 PCV-2 和 PRRSV 的 PCR 检测 | 第79-89页 |
| 1 材料和方法 | 第79-83页 |
| ·病料 | 第79-80页 |
| ·仪器和试剂 | 第80页 |
| ·PCR 引物 | 第80页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎肺脏中 PCV-2 的 PCR 检测 | 第80-81页 |
| ·样品总 DNA 的提取 | 第80-81页 |
| ·PCR 检测 | 第81页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎肺脏中 PRRSV 的 RT-PCR 检测 | 第81-82页 |
| ·样品总 RNA 的提取 | 第81-82页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第82页 |
| ·PCR 产物的克隆及序列测定 | 第82-83页 |
| ·数据处理 | 第83页 |
| 2 结果 | 第83-86页 |
| ·病料检测结果 | 第83页 |
| ·PCR 产物的克隆和序列测定 | 第83页 |
| ·不同地区猪传染性胸膜肺炎病料中 PCV-2、PRRSV 及 PCV-2、PRRSV 共感染的检测 | 第83-85页 |
| ·不同地区临床健康猪组织中 PCV-2 和 PRRSV 的检测 | 第85-86页 |
| ·数据处理结果 | 第86页 |
| 3 讨论 | 第86-89页 |
| 第七章 猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅡA、ApxⅢA、ApxIVA的克隆与表达 | 第89-102页 |
| 1 材料和方法 | 第90-94页 |
| ·仪器和试剂 | 第90页 |
| ·菌株 | 第90页 |
| ·PCR 引物 | 第90页 |
| ·ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA 基因的扩增和克隆 | 第90-91页 |
| ·目的片断和载体的酶切、电泳及回收 | 第91-92页 |
| ·目的片断的酶切 | 第91页 |
| ·pGEX-5X-3 酶切 | 第91-92页 |
| ·酶切产物的电泳及回收 | 第92页 |
| ·DNA 的连接与转化 | 第92页 |
| ·质粒 DNA 的提取与酶切 | 第92-93页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第93页 |
| ·电泳样品制备 | 第93页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE | 第93-94页 |
| ·表达产物的 Western-blotting 检测 | 第94页 |
| 2 结果 | 第94-100页 |
| ·ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA 基因 PCR 扩增结果 | 第94-95页 |
| ·重组质粒的鉴定结果 | 第95-96页 |
| ·血清3 型分离菌株 ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA 基因序列分析 | 第96页 |
| ·血清3 型分离菌株 ApxⅡA、ApxⅢA、ApxⅣA 核酸片段的表达及检测 | 第96-98页 |
| ·重组菌裂解产物 Western-blotting 结果 | 第98-100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 附录 | 第115-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 博士期间发表的主要论文 | 第129页 |
