| 第一章 引言 | 第1-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-38页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·菌种和质粒 | 第15页 |
| ·酶类及其它相关试剂 | 第15页 |
| ·主要试剂及配制 | 第15-19页 |
| ·RNA提取、变性电泳相关试剂 | 第15-16页 |
| ·TAE电泳缓冲液 | 第16页 |
| ·克隆转化相关试剂 | 第16-17页 |
| ·SDS-PAGE电泳相关试剂 | 第17-18页 |
| ·Western blot相关试剂 | 第18-19页 |
| ·仪器 | 第19-20页 |
| ·镰形扇头蜱的实验室饲养 | 第20页 |
| ·人工兔体饲养 | 第20页 |
| ·离开宿主阶段的培养 | 第20页 |
| ·镰形扇头蜱总RNA提取及鉴定 | 第20-21页 |
| ·总RNA的提取 | 第21页 |
| ·RNA浓度的测定 | 第21页 |
| ·RNA变性电泳 | 第21页 |
| ·镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因的克隆 | 第21-28页 |
| ·3’-RACE克隆目的基因的3’端 | 第22-24页 |
| ·5’-RACE克隆目的基因的5’端 | 第24-27页 |
| ·cysA和cysB全长基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR分析cysA、cysB在镰形扇头蜱的分布情况 | 第28-29页 |
| ·Trizol法提取不同部位的总RNA | 第28页 |
| ·Trizol法提取各发育阶段的总RNA | 第28-29页 |
| ·RT-PCR扩增不同部位、各发育阶段的cysA和cysB基因 | 第29页 |
| ·镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因的原核表达 | 第29-33页 |
| ·原核表达载体pET-32a空质粒的提取 | 第29页 |
| ·目的基因双酶切位点的加入 | 第29-30页 |
| ·表达重组质粒的构建 | 第30-32页 |
| ·重组质粒转化宿主菌BL | 第32页 |
| ·诱导时相表达 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第32-33页 |
| ·融合蛋白质的纯化及浓度测定 | 第33-35页 |
| ·cysA和cysB的大量表达 | 第33页 |
| ·蛋白质纯化 | 第33-34页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第34-35页 |
| ·蛋白质免疫原性及免疫保护效果分析 | 第35-38页 |
| ·Western blot分析 | 第35-36页 |
| ·免疫保护实验 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-64页 |
| ·镰形扇头蜱的实验室饲养 | 第38页 |
| ·镰形扇头蜱总RNA提取结果 | 第38-39页 |
| ·目的基因3’端的克隆结果 | 第39-43页 |
| ·目的基因5’端的克隆结果 | 第43-47页 |
| ·cysA和cysB全长基因的克隆 | 第47-52页 |
| ·RT-PCR分析cysA和cysB在镰形扇头蜱中的表达分布 | 第52-55页 |
| ·cysA和cysB基因的原核表达 | 第55-59页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第59-60页 |
| ·Western blot 分析 | 第60-62页 |
| ·重组蛋白免疫 | 第62页 |
| ·免疫保护效果分析 | 第62-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-70页 |
| ·蜱的实验室饲养 | 第64页 |
| ·RNA提取及检测 | 第64-65页 |
| ·RNA质量对RACE方法的影响 | 第65页 |
| ·RACE方法在获取未知基因方面的应用 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR方法在分析目的基因表达丰度中的应用 | 第66-67页 |
| ·外源基因在E.coli中的表达 | 第67-68页 |
| ·免疫保护效果分析 | 第68-70页 |
| 第五章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
