| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 研究背景 | 第16-38页 |
| 第一节 热胁迫反应及生物耐热机制研究 | 第16-24页 |
| 一、 热胁迫对生物体的影响 | 第16-18页 |
| 1. 热胁迫对植物的影响 | 第16-17页 |
| 2. 热胁迫对动物的影响 | 第17-18页 |
| 二、 生物耐热性状的遗传规律 | 第18-19页 |
| 三、 生物体对热胁迫的应答 | 第19-21页 |
| 1. 植物对热胁迫的应答 | 第19-20页 |
| 2. 动物对热胁迫的应答 | 第20-21页 |
| 四、 本研究耐热相关候选基因的研究进展 | 第21-24页 |
| 1. 热休克蛋白基因 | 第21-22页 |
| 2. 氧化胁迫调控蛋白基因 | 第22-23页 |
| 3. 免疫相关蛋白基因 | 第23-24页 |
| 第二节 生物耐热遗传育种的途径 | 第24-31页 |
| 一、 常规育种 | 第25-26页 |
| 1. 选择育种 | 第25-26页 |
| 2. 杂交育种 | 第26页 |
| 二、 转基因育种 | 第26-27页 |
| 三、 标记辅助育种 | 第27-31页 |
| 1. SNP概述 | 第28页 |
| 2. SNPs的检测技术简介 | 第28-31页 |
| 第三节 生物耐热遗传育种的研究进展 | 第31-36页 |
| 一、 农作物耐热遗传育种的研究进展 | 第32-34页 |
| 1. 水稻耐热遗传育种 | 第32-33页 |
| 2. 大白菜耐热遗传育种 | 第33页 |
| 3. 番茄耐热育种 | 第33-34页 |
| 4. 黄瓜耐热育种 | 第34页 |
| 二、 畜牧业耐热遗传育种的研究进展 | 第34-36页 |
| 1. 牛耐热育种 | 第34-35页 |
| 2. 鸡耐热育种 | 第35-36页 |
| 三、 水生生物耐热遗传育种的研究进展 | 第36页 |
| 第四节 本研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 一、 本研究的目的 | 第36-37页 |
| 二、 本研究的意义 | 第37-38页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第38-58页 |
| 第一节 实验材料 | 第38-39页 |
| 一、 实验用扇贝、菌株和细胞系 | 第38页 |
| 二、 主要试剂 | 第38-39页 |
| 三、 主要仪器 | 第39页 |
| 四、 分析软件 | 第39页 |
| 第二节 实验方法 | 第39-58页 |
| 一、 扇贝样品的处理 | 第39-40页 |
| 二、 cDNA模板的制备 | 第40-41页 |
| 三、 基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| 四、 Genomic Walking文库的构建 | 第42-44页 |
| 五、 基因序列的克隆 | 第44-45页 |
| 六、 琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物 | 第45页 |
| 七、 感受态细胞的制备、连接及转化 | 第45-46页 |
| 八、 序列比较与多态性分析 | 第46页 |
| 九、 基因多态性检测 | 第46-48页 |
| 十、 基因多态性与扇贝耐热性的相关分析 | 第48-49页 |
| 十一、荧光实时定量PCR | 第49页 |
| 十二、蛋白的原核重组表达和纯化 | 第49-52页 |
| 十三、Western blot | 第52-53页 |
| 十四、启动子活性检测 | 第53-55页 |
| 十五、重组蛋白的分子伴侣活性检测 | 第55-58页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第58-116页 |
| 第一节 海湾扇贝AiHSP70 基因多态性研究 | 第58-83页 |
| 一、 实验结果 | 第58-79页 |
| 1. 海湾扇贝热敏感群体和耐热群体的划分 | 第58页 |
| 2. 海湾扇贝基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| 3. 海湾扇贝Genome walking文库的建立 | 第59页 |
| 4. AiHSP70 基因启动子克隆及序列分析 | 第59-62页 |
| 5. AiHSP70 基因组序列的克隆及多态性检测 | 第62-66页 |
| 6. AiHSP70 基因多态性分析 | 第66-68页 |
| 7. AiHSP70 基因多态性的检测 | 第68-71页 |
| 8. AiHSP70 基因多态性与海湾扇贝耐热性的关系 | 第71-79页 |
| 二、 讨论 | 第79-83页 |
| 第二节 海湾扇贝AiMT1 基因多态性研究 | 第83-91页 |
| 一、 实验结果 | 第83-89页 |
| 1. AiMT1 基因启动子区序列的克隆及元件分析 | 第83-84页 |
| 2. AiMT1 基因启动子区序列的多态性筛查 | 第84-85页 |
| 3. AiMT1 基因启动子区多态性分析 | 第85-87页 |
| 4. AiMT1 基因启动子区-375 和-337 位点多态性的检测 | 第87-88页 |
| 5. AiMT1 基因启动子区-375 和-337 位点多态性与海湾扇贝耐热性的关系 | 第88-89页 |
| 二、 讨论 | 第89-91页 |
| 第三节 海湾扇贝AiFer和AiTLR基因多态性研究 | 第91-100页 |
| 一、 实验结果 | 第91-98页 |
| 1. AiFer基因多态性及其与海湾扇贝耐热性的关系 | 第91-94页 |
| 2. AiTLR8 基因多态性及其与海湾扇贝耐热性的关系 | 第94-98页 |
| 二、 讨论 | 第98-100页 |
| 1. AiFer基因多态性及其与海湾扇贝耐热性的关系 | 第98-99页 |
| 2. AiTLR8 基因多态性及其与海湾扇贝耐热性的关系 | 第99-100页 |
| 第四节 扇贝耐热相关分子标记的功能研究 | 第100-116页 |
| 一、 实验结果 | 第100-111页 |
| 1. AiHSP70 基因启动子区多态对AiHSP70 mRNA表达的影响 | 第100-103页 |
| 2. AiHSP70 基因启动子区多态对AiHSP70 蛋白表达的影响 | 第103-104页 |
| 3. 两种基因型AiHSP70 启动子对荧光素酶基因表达的影响 | 第104-106页 |
| 4. CfHSP22 基因编码区+94 A/C多态对蛋白分子伴侣活性的影响 | 第106-111页 |
| 二、 讨论 | 第111-116页 |
| 1. AiHSP70 基因启动子区多态影响扇贝耐热性的机制 | 第112-113页 |
| 2. CfHSP22 基因编码区多态影响扇贝耐热性的机制 | 第113-116页 |
| 第四章 结论 | 第116-118页 |
| 第五章 博士阶段其他工作：CfCSP基因克隆及功能研究 | 第118-136页 |
| 第一节 实验材料与方法 | 第119-124页 |
| 一、 实验材料 | 第119-121页 |
| 1. 实验用扇贝和菌株 | 第119页 |
| 2. 主要试剂及主要仪器 | 第119-120页 |
| 3. CfCSP基因相关引物 | 第120-121页 |
| 二、 实验方法 | 第121-124页 |
| 1. 扇贝样品的处理 | 第121页 |
| 2. 扇贝cDNA模板的制备 | 第121页 |
| 3. 3’RACE技术扩增获得基因全长cDNA序列 | 第121页 |
| 4. 目的基因的生物信息学分析 | 第121-122页 |
| 5. 荧光实时定量PCR | 第122页 |
| 6. 蛋白的原核重组表达和纯化 | 第122页 |
| 7. 萤火虫荧光素酶mRNA的体外转录 | 第122页 |
| 8. Gel-shift检测CfCSP重组蛋白的体外核酸结合活性 | 第122-123页 |
| 9. CfCSP蛋白对冷生长缺陷细菌BX04 的互补实验 | 第123-124页 |
| 第二节 实验结果 | 第124-132页 |
| 一、 栉孔扇贝CfCSP基因的cDNA克隆及序列分析 | 第124-126页 |
| 二、 栉孔扇贝CfCSP蛋白的同源性及系统进化分析 | 第126-128页 |
| 三、 栉孔扇贝CfCSP mRNA的组织表达特异性分析 | 第128-129页 |
| 四、 栉孔扇贝CfCSP的mRNA对低温刺激的响应 | 第129-130页 |
| 五、 栉孔扇贝CfCSP蛋白的原核重组表达 | 第130页 |
| 六、 萤火虫荧光素酶mRNA的获得 | 第130-131页 |
| 七、 栉孔扇贝CfCSP重组蛋白的体外核酸结合活性 | 第131-132页 |
| 八、 栉孔扇贝CfCSP蛋白促进冷生长缺陷菌株的低温生长 | 第132页 |
| 第三节 讨论 | 第132-136页 |
| 参考文献 | 第136-160页 |
| 博士期间发表和完成的论文及专利 | 第160-161页 |
