| 第一部分、利用基因组DNA构建随机多肽文库的方法 | 第1-26页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 材料与方法 | 第11-18页 |
| 一、实验材料 | 第11-13页 |
| 二、实验方法 | 第13-18页 |
| 1．载体质粒的制备 | 第13-15页 |
| 2．插入片段的制备--基因组DNA的单酶切及纯化 | 第15页 |
| 3．连接反应 | 第15-16页 |
| 4．连接产物的脱盐 | 第16页 |
| 5．电感受态细胞制备 | 第16页 |
| 6．连接产物的电击转化 | 第16-17页 |
| 7．文库容量的测定 | 第17页 |
| 8．文库质量的鉴定 | 第17页 |
| 9．文库的扩增 | 第17-18页 |
| 实验结果 | 第18-23页 |
| 1．载体质粒的选择及制备 | 第18页 |
| 2．插入片段的制备 | 第18-19页 |
| 3．载体与插入片段的连接及电击转化 | 第19-20页 |
| 4．文库质量的鉴定 | 第20-21页 |
| 5．文库的扩增及质粒提取 | 第21-23页 |
| 讨论 | 第23-25页 |
| 参考文献 | 第25-26页 |
| 第二部分、用基因组DNA构建的新型随机多肽文库研究Synectin PDZ结构域的结合特性 | 第26-98页 |
| 摘要 | 第27-28页 |
| Abstract | 第28-29页 |
| 前言 | 第29-31页 |
| 材料与方法 | 第31-53页 |
| 一、实验材料 | 第31-39页 |
| 二、实验方法 | 第39-53页 |
| 一) 新型随机多肽文库的筛选 | 第39-50页 |
| 1．酵母双杂交筛选随机多肽文库(顺序转化法) | 第39-44页 |
| 2．筛选结果的生物信息学分析 | 第44页 |
| 3．用ONPG为底物的β-半乳糖苷酶活性的检测(相互作用的定量) | 第44-45页 |
| 4．酵母三杂交竞争实验 | 第45-50页 |
| 二) 细胞学实验 | 第50-53页 |
| 5．细胞的复苏、传代、冻存 | 第50页 |
| 6．真核细胞的转染(ECV304) | 第50-52页 |
| 7．单克隆细胞的筛选 | 第52-53页 |
| 实验结果 | 第53-93页 |
| 一、新型随机多肽文库研究Synectin PDZ结构域的结合特性 | 第53-70页 |
| 1．用Synectin筛选DpnⅡ所构建随机多肽文库 | 第54-57页 |
| 2．DpnⅡ文库中所得到的阳性质粒的测序结果 | 第57-63页 |
| 3．用Synectin筛选Tsp509I所构建随机多肽文库 | 第63-64页 |
| 4．Tsp509I文库中所得到的阳性质粒的测序结果 | 第64-67页 |
| 5．筛选结果综合分析 | 第67-70页 |
| 二、用酵母三杂交载体pBridge研究多肽对蛋白质-多肽相互作用的影响 | 第70-88页 |
| 1．三杂交载体pBridge的简介 | 第70-71页 |
| 2．三杂交载体的构建 | 第71-81页 |
| 3．三杂交实验 | 第81-86页 |
| 4．用ONPG为底物的β-半乳糖苷酶活性的检测(ONPG法) | 第86-88页 |
| 三、细胞学实验 | 第88-93页 |
| 1．用于真核细胞转染的重组质粒的构建经 | 第88-91页 |
| 2．真核细胞ECV304的转染 | 第91-92页 |
| 3．单克隆细胞的获得 | 第92-93页 |
| 讨论 | 第93-96页 |
| 一、用新型随机多肽文库在酵母双杂交系统中研究Synectin PDZ结构域的结合特性 | 第93-95页 |
| 二、酵母三杂交的结果为我们用筛选的C-末端序列干扰细胞功能提供了依据 | 第95-96页 |
| 三、随机多肽文库在其它方面的应用 | 第96页 |
| 参考文献 | 第96-98页 |
| 第三部分、用Microsoft Word 2000检索PDZ结构域潜在的结合配体 | 第98-128页 |
| 摘要 | 第99-100页 |
| Abstract | 第100-101页 |
| 前言 | 第101-103页 |
| 方法 | 第103-104页 |
| 1．数据库的下载 | 第103页 |
| 2．PDZ的分类 | 第103页 |
| 3．Blastp检索 | 第103页 |
| 4．用Microsoft Word 2000当中的“查找”功能进行序列的查找 | 第103-104页 |
| 结果 | 第104-106页 |
| 1．Microsoft Word 2000可以成为研究生物信息学的工具 | 第104页 |
| 2．有些PDZ蛋白可能具有多个配体蛋白 | 第104-106页 |
| 讨论 | 第106-113页 |
| 参考文献 | 第113-118页 |
| 综述 | 第118-128页 |
| 参考文献 | 第125-128页 |
| 第四部分、人SH2结构域非冗余数据库的构建及其生物信息学分析 | 第128-140页 |
| 摘要 | 第129-130页 |
| Abstract | 第130-131页 |
| 前言 | 第131-132页 |
| 材料与方法 | 第132-133页 |
| 一、人所有SH2结构域的检索 | 第132页 |
| 1．CDART检索 | 第132页 |
| 2．SMART检索 | 第132页 |
| 二、SH2结构域的界定 | 第132页 |
| 三、人SH2结构域非冗余数据库的构建(冗余(重复)序列的剔除) | 第132页 |
| 四、人SH2结构域的多序列比较 | 第132-133页 |
| 结果 | 第133-138页 |
| 一、人SH2结构域非冗余数据库构建 | 第133页 |
| 二、多序列比较与SH2结构域结合序列的预测 | 第133-136页 |
| 三、生长因子受体结合蛋白(GRB)家族成员的分类问题 | 第136-138页 |
| 讨论 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 附录 | 第141-143页 |
