| 1 引言 | 第1-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-28页 |
| ·材料 | 第14-17页 |
| ·IBDV标准毒株和参考毒株 | 第14页 |
| ·鸡胚、血清和试验动物 | 第14页 |
| ·细胞培养所需试剂 | 第14页 |
| ·病毒纯化及免疫球蛋白IgG制备所需试剂 | 第14页 |
| ·辣根过氧化物酶标记抗体的制备及ELISA检测所需主要试剂 | 第14-15页 |
| ·免疫胶体金制备及其检测所需要的主要试剂 | 第15页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)所需主要试剂 | 第15页 |
| ·主要溶液的配制 | 第15-17页 |
| ·其它材料 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-28页 |
| ·IBDV抗原的制备 | 第17-18页 |
| ·IBDV病毒抗原的鉴定 | 第18-19页 |
| ·兔抗IBDV免疫血清的制备 | 第19页 |
| ·小鼠抗IBDV免疫血清的制备 | 第19页 |
| ·羊抗兔免疫血清的制备 | 第19-20页 |
| ·羊抗兔免疫球蛋白IgG的提取 | 第20-21页 |
| ·羊抗兔免疫球蛋白IgG的纯度鉴定 | 第21页 |
| ·兔抗IBDV免疫球蛋白IgG粗提物的制备 | 第21页 |
| ·小鼠抗IBDV免疫球蛋白IgG粗提物的制备 | 第21页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体的制备 | 第21-22页 |
| ·免疫胶体金的制备 | 第22-23页 |
| ·双夹心ELISA检测IBDV抗原方法的建立 | 第23-24页 |
| ·间接Dot-ELISA检测鸡IBDV抗原方法的建立 | 第24-25页 |
| ·斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)检测鸡IBDV抗原方法的建立 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR检测IBDV抗原方法的建立 | 第26-28页 |
| 3 结果 | 第28-39页 |
| ·IBDV的纯化和鉴定 | 第28-29页 |
| ·病毒含量的测定 | 第28页 |
| ·琼脂扩散试验检测IBDV | 第28页 |
| ·病毒蛋白分析 | 第28-29页 |
| ·免疫血清的制备 | 第29页 |
| ·兔抗及小鼠抗IBDV免疫血清琼扩滴度的测定 | 第29页 |
| ·羊抗兔免疫血清琼扩滴度的测定 | 第29页 |
| ·免疫球蛋白IgG的制备 | 第29-30页 |
| ·兔抗及小鼠抗IBDV免疫球蛋白IgG粗提物蛋白浓度的测定 | 第29-30页 |
| ·羊抗兔免疫球蛋白IgG的分离及纯化 | 第30页 |
| ·标记抗体的制备 | 第30-32页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体结果 | 第30-31页 |
| ·胶体金标记抗体最适蛋白浓度的确定 | 第31-32页 |
| ·胶体金标记抗体的纯度鉴定 | 第32页 |
| ·双夹心ELISA检测IBDV抗原方法的建立 | 第32-34页 |
| ·最佳试验条件的确定 | 第32页 |
| ·双夹心ELISA特异性测定 | 第32-33页 |
| ·双夹心ELISA敏感性测定及其与AGP的比较 | 第33-34页 |
| ·双夹心ELISA重复性测定 | 第34页 |
| ·间接Dot-ELISA检测鸡IBDV抗原 | 第34-35页 |
| ·兔抗IBDV lgG最适浓度的确定 | 第34页 |
| ·间接Dot-ELISA特异性测定 | 第34-35页 |
| ·间接Dot-ELISA敏感性测定及其与AGP的比较 | 第35页 |
| ·间接Dot-ELISA重复性测定 | 第35页 |
| ·Dot-IGSS检测鸡IBDV抗原 | 第35-36页 |
| ·兔抗IBDV lgG最适浓度的确定 | 第35页 |
| ·胶体金标记抗体最适浓度的确定 | 第35页 |
| ·Dot-IGSS特异性测定 | 第35-36页 |
| ·Dot-IGSS敏感性测定及其与AGP的比较 | 第36页 |
| ·Dot-IGSS重复性测定 | 第36页 |
| ·RT-PCR方法检测IBDV抗原 | 第36-39页 |
| ·IBDV不同毒株的RT-PCR扩增结果 | 第36-37页 |
| ·检测IBDV RT-PCR特异性测定结果 | 第37-38页 |
| ·检测IBDV RT-PCR敏感性测定结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-44页 |
| ·IBDV的增殖 | 第39页 |
| ·IBDV的纯化 | 第39-40页 |
| ·免疫酶标记抗体 | 第40页 |
| ·胶体金标记抗体 | 第40-41页 |
| ·双夹心ELISA | 第41页 |
| ·Dot-ELISA | 第41-42页 |
| ·斑点免疫金银染色法 | 第42页 |
| ·金标抗体 | 第42页 |
| ·非特异性反应 | 第42页 |
| ·RT-PCR | 第42-44页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·操作应用 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-75页 |
