| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-65页 |
| ·细菌素 | 第20-21页 |
| ·羊毛硫细菌素 | 第21-24页 |
| ·乳链菌肽的结构特征 | 第24-33页 |
| ·乳链菌肽的分子分析 | 第25页 |
| ·不饱和氨基酸Dha及Dhb | 第25-26页 |
| ·乳链菌肽的特性 | 第26-32页 |
| ·溶解性 | 第26-27页 |
| ·稳定性 | 第27页 |
| ·乳链菌肽的抑菌谱及抑菌作用 | 第27-29页 |
| ·Nisin分子结构的NMR和CD研究 | 第29-32页 |
| ·乳链菌肽的应用 | 第32-33页 |
| ·乳链菌肽的生物合成 | 第33-35页 |
| ·乳链菌肽生物合成基因簇 | 第33-34页 |
| ·乳链菌肽的成熟过程 | 第34页 |
| ·乳链菌肽的生物合成调控 | 第34-35页 |
| ·乳链菌肽的作用机制 | 第35-40页 |
| ·孔道的形成 | 第35页 |
| ·膜组分对生物活性的影响 | 第35-36页 |
| ·孔道形成的能量 | 第36页 |
| ·第二种作用方式 | 第36页 |
| ·孔道形成模型 | 第36-38页 |
| ·LipidⅡ在nisin活性中的作用 | 第38-40页 |
| ·乳链菌肽定点突变研究 | 第40-46页 |
| ·乳酸菌基因表达的载体类型 | 第40-42页 |
| ·克隆载体 | 第40页 |
| ·表达载体 | 第40-42页 |
| ·乳链菌肽及其突变体的表达系统 | 第42页 |
| ·定点突变的原理 | 第42-44页 |
| ·乳链菌肽的定点突变研究 | 第44-46页 |
| ·乳链菌肽诱导表达调控系统及其它乳酸菌的诱导调控系统 | 第46-53页 |
| ·乳链菌肽诱导表达调控系统 | 第46页 |
| ·乳酸菌中基因组成特点 | 第46-48页 |
| ·研究乳酸菌中基因表达调控系统的报告基因 | 第48-51页 |
| ·cat基因 | 第48-49页 |
| ·lacZ基因 | 第49页 |
| ·gfp基因 | 第49-50页 |
| ·gusA基因 | 第50-51页 |
| ·乳酸菌中的其它诱导调控系统 | 第51-53页 |
| ·糖调控系统 | 第51-52页 |
| ·Φ31诱导系统 | 第52页 |
| ·温度诱导系统 | 第52页 |
| ·依赖pH的调控系统 | 第52-53页 |
| ·本工作目的和意义 | 第53-55页 |
| ·乳链菌肽基因文库的构建及生物合成基因蔟的筛选 | 第53页 |
| ·乳链菌肽的结构与功能关系的研究 | 第53-54页 |
| ·nisZ启动子研究 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 第二章 乳链菌肽基因文库的构建及生物合成基因蔟的筛选 | 第65-89页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·材料与方法 | 第65-78页 |
| ·试验材料 | 第65-71页 |
| ·菌株 | 第65页 |
| ·质粒及载体 | 第65-66页 |
| ·PCR引物 | 第66页 |
| ·工具酶和化学试剂 | 第66-67页 |
| ·培养基 | 第67-68页 |
| ·缓冲液及试剂 | 第68-71页 |
| ·试验方法 | 第71-78页 |
| ·碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA | 第71页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的氯化钙转化 | 第71页 |
| ·乳酸乳球菌总DNA的提取(Ⅰ) | 第71-72页 |
| ·λ-DNA的提取 | 第72-73页 |
| ·乳酸乳球菌质粒DNA的抽提(Ⅱ):改良的Kieser法 | 第73页 |
| ·乳酸乳球菌质粒DNA的电击转化 | 第73-74页 |
| ·用DNA片段玻璃奶回收Kit回收纯化DNA | 第74页 |
| ·低熔点琼脂糖回收10Kb以上DNA片段 | 第74-75页 |
| ·非放射性标记探针及杂交程序 | 第75-76页 |
| ·PCR | 第76-77页 |
| ·乳链菌肽抗菌活性及效价的测定 | 第77页 |
| ·粗提液的制备 | 第77-78页 |
| ·Native PAGE | 第78页 |
| ·试验结果 | 第78-87页 |
| ·乳酸乳球菌AL2基因文库的构建 | 第78-80页 |
| ·乳链菌肽生物合成基因簇的筛选 | 第80-83页 |
| ·nisG基因探针的制备 | 第80-81页 |
| ·噬斑原位杂交筛选 | 第81-82页 |
| ·nisA基因探针制备 | 第82页 |
| ·点杂交 | 第82-83页 |
| ·含有完整乳链菌肽生物合成基因簇的噬菌体的验证 | 第83-84页 |
| ·Southern杂交 | 第83页 |
| ·PCR验证 | 第83-84页 |
| ·nisG的序列测定 | 第84页 |
| ·乳链菌肽前体基因的克隆 | 第84-86页 |
| ·乳链菌肽前体基因在乳酸乳球菌NZ9800中的亚克隆及表达 | 第86-87页 |
| ·讨论 | 第87页 |
| ·小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-89页 |
| 第三章 乳链菌肽的结构与功能关系的研究-组合双突变 | 第89-108页 |
| ·引言 | 第89页 |
| ·材料与方法 | 第89-95页 |
| ·试验材料 | 第89-92页 |
| ·菌株 | 第89-90页 |
| ·质粒 | 第90页 |
| ·培养基 | 第90页 |
| ·工具酶 | 第90页 |
| ·与SDS-PAGE有关试剂 | 第90-92页 |
| ·Sephadex CM-25层析试剂 | 第92页 |
| ·凝胶Sephadex G-25层析试剂 | 第92页 |
| ·与RP-HPLC层析有关的试剂 | 第92页 |
| ·总蛋白测定试剂 | 第92页 |
| ·试验方法 | 第92-95页 |
| ·DNA的提取和转化 | 第92页 |
| ·nisZ基因的定点突变及序列分析 | 第92-93页 |
| ·乳链菌肽变体的纯化 | 第93页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第93-94页 |
| ·阳离子交换树脂Sephadex CM-25层析纯化 | 第94页 |
| ·凝胶Sephadex G-50层析纯化 | 第94-95页 |
| ·RP-HPLC层析 | 第95页 |
| ·乳链菌肽变体的特性研究 | 第95页 |
| ·试验结果 | 第95-105页 |
| ·突变模板质粒pYW101的构建 | 第95-97页 |
| ·组合双突变体质粒pYJS2731和pYJS231的构建 | 第97页 |
| ·乳酸菌中重组质粒pYJS2731和pYJS231的构建 | 第97-99页 |
| ·乳链菌肽突变体的表达及性质研究 | 第99-105页 |
| ·乳链菌肽突变体的抑菌活性及效价试验 | 第99页 |
| ·N27K／H31K和T2S／H31K乳链菌肽突变体的纯化及SDS-PAGE电泳 | 第99-100页 |
| ·凝胶G-25层析纯化 | 第100-102页 |
| ·乳链菌肽突变体的最小抑菌浓度测定 | 第102页 |
| ·乳链菌肽突变体的抑菌谱测定 | 第102-103页 |
| ·乳链菌肽突变体稳定性的测定 | 第103-104页 |
| ·乳链菌肽变体溶解性的测定 | 第104-105页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| ·小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-108页 |
| 第四章 乳链菌肽的结构与功能关系的研究-B环的定点突变 | 第108-124页 |
| ·引言 | 第108页 |
| ·材料与方法 | 第108-114页 |
| ·试验材料 | 第108-111页 |
| ·菌株 | 第108-109页 |
| ·质粒 | 第109页 |
| ·培养基 | 第109页 |
| ·工具酶 | 第109页 |
| ·与SDS-PAGE有关试剂 | 第109-110页 |
| ·Sephadex CM-25层析试剂 | 第110页 |
| ·凝胶Sephadex G-25层析试剂 | 第110-111页 |
| ·与RP-HPLC层析有关的试剂 | 第111页 |
| ·总蛋白测定试剂 | 第111页 |
| ·试验方法 | 第111-114页 |
| ·DNA的提取和转化 | 第111页 |
| ·nisZ基因的定点突变及序列分析 | 第111页 |
| ·乳链菌肽变体的纯化 | 第111页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第111-112页 |
| ·阳离子交换树脂Sephadex CM-25层析纯化 | 第112-113页 |
| ·凝胶Sephadex G-25层析纯化 | 第113页 |
| ·RP-HPLC层析 | 第113页 |
| ·乳链菌肽变体的特性研究 | 第113-114页 |
| ·试验结果 | 第114-121页 |
| ·定点突变和重组质粒pYJT8S的构建 | 第114-115页 |
| ·乳酸菌中重组质粒pYJT8S的构建 | 第115-116页 |
| ·T8S乳链菌肽突变体的表达及性质研究 | 第116-121页 |
| ·T8S乳链菌肽突变体的抑菌活性及效价试验 | 第116页 |
| ·T8S乳链菌肽突变体的纯化及SDS-PAGE电泳 | 第116-117页 |
| ·T8S凝胶Sephadex G-25层析纯化 | 第117-118页 |
| ·T8S乳链菌肽突变体的最小抑菌浓度测定 | 第118-119页 |
| ·T8S乳链菌肽突变体的抑菌谱测定 | 第119页 |
| ·T8S乳链菌肽突变体稳定性的测定 | 第119-121页 |
| ·T8S乳链菌肽突变体溶解性的测定 | 第121页 |
| ·小结 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-124页 |
| 第五章 乳链菌肽的结构与功能关系的研究-铰链区突变 | 第124-154页 |
| ·引言 | 第124-125页 |
| ·材料与方法 | 第125-134页 |
| ·试验材料 | 第125-130页 |
| ·菌株 | 第125-126页 |
| ·质粒 | 第126-127页 |
| ·培养基 | 第127页 |
| ·工具酶和试剂 | 第127页 |
| ·与SDS-PAGE有关试剂 | 第127-128页 |
| ·Sephadex CM-25层析试剂 | 第128-129页 |
| ·凝胶Sephadex G-25层析试剂 | 第129页 |
| ·总蛋白测定试剂 | 第129页 |
| ·与RP-HPLC层析有关的试剂 | 第129页 |
| ·与1H NMR有关的试剂 | 第129页 |
| ·与CD有关的试剂 | 第129-130页 |
| ·试验方法 | 第130-134页 |
| ·DNA的提取和转化 | 第130页 |
| ·nisZ基因的定点突变及序列分析 | 第130页 |
| ·乳链菌肽变体的纯化 | 第130-131页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第131-132页 |
| ·阳离子交换树脂Sephadex CM-25层析纯化 | 第132页 |
| ·凝胶Sephadex G-25层析纯化 | 第132页 |
| ·乳链菌肽突变体的特性研究 | 第132-133页 |
| ·乳链菌肽突变体的结构研究 | 第133-134页 |
| ·试验结果 | 第134-147页 |
| ·定点突变和重组质粒pYWN20K等的构建 | 第134-136页 |
| ·乳酸菌中重组质粒pYJN20K等的构建 | 第136-137页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的表达及性质研究 | 第137-143页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的抑菌活性及效价试验 | 第137-138页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的Sephadex CM-25层析纯化 | 第138页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的凝胶Sephadex G-25层析纯化 | 第138页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的SDS-PAGE | 第138-139页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的最小抑菌浓度测定 | 第139-140页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的抑菌谱测定 | 第140-141页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体稳定性的测定 | 第141-143页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体溶解性的测定 | 第143页 |
| ·N20K和M21K突变体的结构研究 | 第143-147页 |
| ·N20K和M21K的RP-HPLC纯度检测 | 第144-145页 |
| ·N20K和M21K的1H-NMR检测 | 第145页 |
| ·N20K和M21K的UV吸收谱检测 | 第145-147页 |
| ·N20K和M21K的CD谱检测 | 第147页 |
| ·讨论 | 第147-150页 |
| ·铰链区正电荷突变 | 第147-148页 |
| ·铰链区负电荷突变 | 第148-149页 |
| ·铰链区不同质量氨基酸突变 | 第149页 |
| ·采用其它羊毛硫细菌素铰链区的突变 | 第149-150页 |
| ·小结 | 第150-152页 |
| ·铰链区突变体的分泌表达 | 第150页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的抑菌活性和最小抑菌浓度 | 第150页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的抑菌谱 | 第150页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的稳定性 | 第150页 |
| ·铰链区乳链菌肽突变体的溶解性 | 第150-151页 |
| ·N20K和M21K突变体的结构研究 | 第151-152页 |
| 参考文献 | 第152-154页 |
| 第六章 nisZ启动子的研究 | 第154-176页 |
| ·引言 | 第154页 |
| ·材料与方法 | 第154-163页 |
| ·试验材料 | 第154-157页 |
| ·菌株 | 第154页 |
| ·质粒 | 第154-155页 |
| ·PCR引物 | 第155-156页 |
| ·工具酶和化学试剂 | 第156页 |
| ·培养基 | 第156页 |
| ·缓冲液及试剂 | 第156-157页 |
| ·试验方法 | 第157-163页 |
| ·碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA | 第157页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的氯化钙转化 | 第157-158页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的电击转化 | 第158页 |
| ·乳酸乳球菌质粒DNA的抽提(Ⅰ) | 第158-159页 |
| ·乳酸乳球菌质粒DNA的抽提(Ⅱ):改良的Kieser法 | 第159页 |
| ·乳酸乳球菌质粒DNA的电击转化 | 第159-160页 |
| ·用DNA片段玻璃奶回收Kit回收纯化DNA | 第160页 |
| ·PCR反应 | 第160-161页 |
| ·用Site-directed Mutagenesis Kit进行定点突变 | 第161-162页 |
| ·Nisin的诱导表达 | 第162页 |
| ·总蛋白测定 | 第162页 |
| ·GUS活性测定 | 第162-163页 |
| ·试验结果 | 第163-174页 |
| ·gusA编码区和nisZ启动子的翻译融合 | 第163-167页 |
| ·gusA编码区和nisZ启动子的PCR扩增 | 第163-164页 |
| ·重组质粒pYG01和pYG02的构建 | 第164-166页 |
| ·重组质粒pYG02在L.lactis NZ9800中的诱导表达 | 第166-167页 |
| ·重组质粒pYG01p和pYG02p的构建 | 第167-171页 |
| ·仅含有promoter1的重组质粒pYG01p的构建 | 第167-169页 |
| ·重组质粒pYG02p的构建 | 第169-171页 |
| ·宿主菌L.lactis NZ9800对乳链菌肽敏感性 | 第171-172页 |
| ·突变pYG01p和pYG02p在L.lactis NZ9800中的诱导表达 | 第172页 |
| ·重组质粒pYG03p和pYG10p的构建 | 第172-174页 |
| ·突变pYG10p和pYG03p质粒在L.lactis NZ9800中的诱导表达 | 第174页 |
| ·小结 | 第174-175页 |
| 参考文献 | 第175-176页 |
| 第七章 结论与展望 | 第176-180页 |
| ·结论 | 第176-177页 |
| ·展望 | 第177-180页 |
| 作者简历 | 第180-181页 |
| 博士阶段发表的论文 | 第181-182页 |
| 致谢 | 第182页 |
