符号、缩略语 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-10页 |
英文摘要 | 第10-11页 |
引言 | 第11-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-37页 |
1. 棉花抗黄萎病育种概况 | 第13-16页 |
1.1 黄萎病病原及其危害 | 第13-14页 |
1.2 棉花黄萎病的致病机理 | 第14页 |
1.3 棉花对黄萎病的抗性机制 | 第14-15页 |
1.4 棉花抗黄萎病育种 | 第15-16页 |
2. 抗病基因工程研究进展 | 第16-25页 |
2.1 基因—基因假说 | 第17页 |
2.2 抗病基因的克隆及其产物特征 | 第17-19页 |
2.3 无毒基因(avr)和激发子(elicitor) | 第19-20页 |
2.4 防卫反应基因和防卫反应 | 第20-21页 |
2.5 系统获得性抗性(SAR) | 第21-22页 |
2.6 SA和H2O2在SAR过程中的作用 | 第22-23页 |
2.7 SAR信号传导途径中的功能基因 | 第23-25页 |
3. 抗病基因策略 | 第25-28页 |
3.1 基于R基因和avr基因的抗病策略 | 第25-26页 |
3.2 基于防卫反应基因的抗病策略 | 第26-27页 |
3.3 基于SAR的抗病策略 | 第27-28页 |
3.4 ISR及其它诱导系统抗性策略 | 第28页 |
4. 植物病原菌诱导型启动子研究进展 | 第28-35页 |
4.1 几种典型的病原菌诱导型启动子 | 第29-31页 |
4.2 决定病原诱导型的启动子顺式作用元件 | 第31-33页 |
4.3 病原诱导型启动子在抗病基因工程中的应用 | 第33-34页 |
4.4 展望 | 第34-35页 |
5. 本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
第二章 NPR1基因的转化和检测 | 第37-48页 |
1. 材料 | 第37-38页 |
1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
1.2 植物材料 | 第37页 |
1.3 试剂 | 第37-38页 |
1.4 培养基 | 第38页 |
2. 方法 | 第38-42页 |
2.1 pNPR1转化土壤根癌农杆菌LBA | 第38-39页 |
2.1.1 土壤根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第38页 |
2.1.2 质粒转化农杆菌感受态LBA | 第38-39页 |
2.2 植物的转化 | 第39-42页 |
2.2.1 农杆菌活化 | 第39页 |
2.2.2 烟草的遗传转化和植株再生 | 第39页 |
2.2.3 棉花的遗传转化和胚性愈伤的诱导 | 第39-40页 |
2.2.4 烟草转基因植株DNA的提取 | 第40页 |
2.2.5 烟草转基因植株的PCR检测 | 第40页 |
2.2.6 烟草转基因植株的Southern杂交分析 | 第40-42页 |
2.2.7 烟草转基因植株的抗病性鉴定 | 第42页 |
3. 结果及分析 | 第42-45页 |
3.1 pNPR1转化LBA4404阳性克隆的鉴定 | 第42-43页 |
3.2 转基因烟草植株再生 | 第43页 |
3.3 转基因烟草的PCR检测 | 第43页 |
3.4 转基因烟草的Southern杂交分析 | 第43-44页 |
3.5 转基因烟草的抗病性鉴定 | 第44页 |
3.6 转NPR1基因棉花抗性愈伤的获得 | 第44-45页 |
3.7 转NPR1基因棉花的获得、检测及抗病性鉴定 | 第45页 |
4. 讨论 | 第45-48页 |
第三章 NPR1基因的病原诱导型载体(pIPR)的构建和转化 | 第48-57页 |
1. 材料 | 第48-49页 |
1.1 菌种和质粒 | 第48页 |
1.2 植物材料 | 第48页 |
1.3 试剂 | 第48-49页 |
2. 方法 | 第49-53页 |
2.1 Pr1-a基因启动子的克隆 | 第49-50页 |
2.1.1 PCR引物设计 | 第49页 |
2.1.2 烟草Wisconsin38 DNA的提取 | 第49-50页 |
2.1.3 PCR扩增 | 第50页 |
2.1.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第50页 |
2.1.5 回收 | 第50页 |
2.1.6 测序 | 第50页 |
2.2 质粒的提取 | 第50-51页 |
2.3 对质粒进行双酶切 | 第51-52页 |
2.4 酶切产物的回收 | 第52页 |
2.5 连接反应 | 第52页 |
2.6 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第52页 |
2.7 质粒的大量提取 | 第52页 |
2.8 花粉管通道法转化棉花 | 第52-53页 |
2.9 转化棉株的Kna检测 | 第53页 |
3. 结果与分析 | 第53-55页 |
3.1 Pr1-a基因启动子的克隆 | 第53-54页 |
3.2 pIPR载体的构建 | 第54页 |
3.3 pIPR载体的酶切鉴定 | 第54-55页 |
3.4 花粉管通道法转化棉花 | 第55页 |
4. 讨论 | 第55-57页 |
第四章 结论及展望 | 第57-59页 |
1. 结论 | 第57-58页 |
2. 展望 | 第58-59页 |
附录:彩色图片 | 第59-65页 |
主要参考文献 | 第65-72页 |