| 致谢 | 第1-4页 |
| 前言 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-6页 |
| 英文摘要 | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-16页 |
| 1．1． 植物生物工程产生有用物质概述 | 第10-11页 |
| 1．2． 烟草植物生物工程研究进展 | 第11-14页 |
| 1．2．1． 烟草细胞、组织及发状根培养研究概况 | 第11页 |
| 1．2．2． 通过烟草细胞及组织培养产生有用物质的生物工程研究进展 | 第11-13页 |
| 1．2．2．1． 培养的烟草细胞及组织烟碱合成研究 | 第11-12页 |
| 1．2．2．2． 烟草细胞大规摸培养研究 | 第12-13页 |
| 1．2．3． 烟草发状根培养生物工程研究进展 | 第13-14页 |
| 1．2．3．1． 烟草发状根培养物质合成研究 | 第13-14页 |
| 1．2．3．2． 烟草发状根大规模培养研究 | 第14页 |
| 1．3． 论文设计思路 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-25页 |
| 2．1． 实验材料 | 第16页 |
| 2．2． 实验方法 | 第16-25页 |
| 2．2．1． 烟草无菌外植体的获得方法 | 第16-17页 |
| 2．2．1．1． 灭菌发芽试验及无菌种子苗培养 | 第16页 |
| 2．2．1．1．1． 灭菌发芽试验 | 第16页 |
| 2．2．1．1．2． 无菌种子苗培养 | 第16页 |
| 2．2．1．2． 体细胞胚再再生苗培养 | 第16页 |
| 2．2．1．3． 无菌种子苗营养繁殖再生苗培养 | 第16-17页 |
| 2．2．2． 烟草细胞悬浮培养体系的建立方法 | 第17-19页 |
| 2．2．2．1． 外值体诱导培养获得烟草愈伤组织 | 第17页 |
| 2．2．2．2． 烟草胚性愈伤组织的获得及适合细胞悬浮培养的培养基筛选 | 第17-18页 |
| 2．2．2．3． 愈伤组织的鲜重、干重生长倍增曲线的测定 | 第18页 |
| 2．2．2．4． 烟草细胞悬浮培养体系的建立 | 第18页 |
| 2．2．2．5． 细胞悬浮培养体系鲜重、干重、PCV％增长曲线的测定 | 第18-19页 |
| 2．2．3． 烟草发状根液体培养体系的建立方法 | 第19-20页 |
| 2．2．3．1． A_4发根农杆菌纯化筛选及其工程菌液的制备 | 第19页 |
| 2．2．3．2． 发状根的诱导产生 | 第19页 |
| 2．2．3．3． Ri-质粒转化的初步判断 | 第19页 |
| 2．2．3．4． 发状根的除菌及其固体培养体系的建立 | 第19-20页 |
| 2．2．3．5． 发状根液体培养体系的建立 | 第20页 |
| 2．2．4． 烟草细胞培养的烟碱生物合成研究方法 | 第20-23页 |
| 2．2．4．1． 生产培养基的筛选 | 第20-23页 |
| 2．2．4．2． 培养物理因素的选择 | 第23页 |
| 2．2．4．2．1． 光照的选择 | 第23页 |
| 2．2．4．2．2． 培养温度的选择 | 第23页 |
| 2．2．4．2．3． 摇床转速的选择 | 第23页 |
| 2．2．4．3． 烟草细胞悬浮培养烟碱生物合成曲线的测定 | 第23页 |
| 2．2．5． 发状根培养的烟碱高效合成研究方法 | 第23页 |
| 2．2．6． 样品中烟碱的提取和检测 | 第23-24页 |
| 2．2．6．1． 烟碱的提取 | 第23-24页 |
| 2．2．6．2． 提取样品的检测与计算 | 第24页 |
| 2．2．7． 烟草发状根及细胞中烟碱的生物活性测定 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与分析 | 第25-44页 |
| 3．1． 烟草无菌外植体的获得 | 第25-27页 |
| 3．1．1． 灭菌发芽试验结果 | 第25-26页 |
| 3．1．2． 烟草无菌苗植株的获得 | 第26-27页 |
| 3．2． 烟草细胞悬浮培养体系的建立 | 第27-35页 |
| 3．2．1． 烟草愈伤组织的诱导结果 | 第27-29页 |
| 3．2．2． 生长培养基及胚性愈伤组织的获得 | 第29-31页 |
| 3．2．3． 胚性愈伤组织的生长曲线 | 第31-33页 |
| 3．2．4． 建立烟草细胞悬浮培养体系及其生长曲线 | 第33-35页 |
| 3．2．4．1 建立的烟草细胞悬浮培养体系 | 第33页 |
| 3．2．4．2． 细胞悬浮培养体系鲜重、干重、PCV％增长曲线的测定 | 第33-35页 |
| 3．3． 烟草发状根培养体系的建立 | 第35-40页 |
| 3．3．1． 发状根的诱导结果 | 第35-36页 |
| 3．3．2． Ri-质粒转化的初步判断结果 | 第36-37页 |
| 3．3．3． 发状根固体培养体系的生长 | 第37-39页 |
| 3．3．4． 发状根液体培养体系的建立 | 第39-40页 |
| 3．4． 细胞悬浮培养烟碱生物合成研究结果 | 第40-41页 |
| 3．4．1． 生产培养基的筛选结果 | 第40页 |
| 3．4．2． 物理因素的选择结果 | 第40-41页 |
| 3．4．2．1． 光照的选择 | 第40页 |
| 3．4．2．2． 培养温度的选择 | 第40-41页 |
| 3．4．3． 烟草细胞悬浮培养烟碱生物合成曲线 | 第41页 |
| 3．5． 高效合成烟碱的烟草发状根培养 | 第41-42页 |
| 3．6． 激素自养烟草愈伤组织培养株系Y_R烟碱测定结果 | 第42页 |
| 3．7． 培养产生烟碱的生物活性测定结果 | 第42-44页 |
| 第四章 讨论 | 第44-50页 |
| 4．1． 关于实验材料的消毒灭菌与无菌苗的获得 | 第44-45页 |
| 4．1．1． 不同实验材料应选用不同的消毒药剂与处理时间 | 第44页 |
| 4．1．2． 不同途径获得的烟草外植体Ri-质粒的转化效果比较 | 第44-45页 |
| 4．2． 培养基差异对烟草愈伤组织与细胞生长的影响 | 第45页 |
| 4．2．1． 基本培养基对烟草愈伤组织与细胞生长的影响 | 第45页 |
| 4．2．2． 激素对烟草愈伤组织与细胞生长的影响 | 第45页 |
| 4．3． 关于烟草发状根的诱导与生长 | 第45-46页 |
| 4．3．1． A_1发根农杆菌对烟草不同器官侵染的发根情况不同 | 第45-46页 |
| 4．3．2． 诱导产生的发状根及建立的发状根培养体系生长特点不同 | 第46页 |
| 4．4． 细胞悬浮培养烟碱的生物合成 | 第46-47页 |
| 4．4．1． 细胞悬浮培养烟碱产生的决定因素 | 第46-47页 |
| 4．4．2． 细胞悬浮培养中烟碱的合成、积累与转化 | 第47页 |
| 4．5． 烟草发状根具有较大的烟碱生物合成潜力 | 第47-48页 |
| 4．6． 对烟草愈伤组织培养株系Y_R还有待进一步的研究 | 第48页 |
| 4．7． 烟草发状根与细胞培养产生的烟碱具有天然烟碱的杀虫活性 | 第48页 |
| 4．8． 通过植物生物工程生产烟碱及其它植物源物质展望 | 第48-50页 |
| 第五章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附件 | 第58页 |
