| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-13页 |
| 专业名词缩写中英文对照表 | 第13-14页 |
| 技术路线图 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一章 材料与方法 | 第19-43页 |
| 一 材料 | 第19-22页 |
| 1 主要材料 | 第19页 |
| 2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 4 质粒和细菌 | 第21-22页 |
| 二 方法 | 第22-43页 |
| 1 感受态菌种的制备 | 第22-23页 |
| 2 细胞和组织总RNA的获得 | 第23-24页 |
| 3 大鼠基因组DNA获得 | 第24页 |
| 4 人全血gDNA的抽提 | 第24-25页 |
| 5 RNA逆转录得到cDNA | 第25页 |
| 6 NTERA-2细胞培养 | 第25页 |
| 7 hTERT及PEG3启动子和sTRAIL基因扩增 | 第25-27页 |
| 8 胶回收扩增产物—基因 | 第27页 |
| 9 基因与T载体连接 | 第27-28页 |
| 10 T-sTRAIL T-PEG3及T-hTERT质粒抽提 | 第28页 |
| 11 T-sTRAIL T-PEG3及T-hTERT基因阳性克隆PCR和酶切签定 | 第28-30页 |
| 12 pAAV-PEG3/hTERT-sTRAIL治疗载体及PGL3-PEG3载体的构建 | 第30-31页 |
| 13 质粒的中量制备 | 第31-32页 |
| 14 pAAV-PEG3/hTERT-sTRAIL表达载体及PGL3-PEG3/hTER在细胞中的表达 | 第32-33页 |
| 15 报道基因荧光素酶活性分析 | 第33页 |
| 16 NTERA-2细胞胚胎全能性基因及畸胎瘤三胚层分化基因PCR扩增 | 第33-34页 |
| 17 流式细胞仪检测CD133、SSEA-4、ABCG2、TRA-1-60 | 第34页 |
| 18 早期凋亡检测 | 第34-35页 |
| 19 中期凋亡检测 | 第35页 |
| 20 半定量、定量RT-PCR检测 | 第35-37页 |
| 21 Western blot的步骤 | 第37-38页 |
| 22 体外成瘤实验 | 第38页 |
| 23 动物模型构建及治疗 | 第38-39页 |
| 24 肿瘤体积测量,荷瘤SCID小鼠称重 | 第39页 |
| 25 细胞毒实验 | 第39页 |
| 26 免疫组化 | 第39-40页 |
| 27 TUNUL检测 | 第40-41页 |
| 28 HE染色 | 第41页 |
| 29 拟胚体形成 | 第41-42页 |
| 30 统计分析 | 第42-43页 |
| 第二章 实验结果 | 第43-90页 |
| 1 PEG3和hTERT启动子扩增 | 第43-46页 |
| 2 sTRAIL基因扩增 | 第46-48页 |
| 3 AAV-PEG-sTRAIL及AAV-hTERT-sTRAIL治疗载体的构建 | 第48页 |
| 4 PGL3-PEG3萤光素报告基因载体的构建 | 第48-51页 |
| 5 PEG3启动子在不同细胞系中转基因表达能力分析 | 第51页 |
| 6 NTERA-2细胞全能基因表达分析 | 第51-53页 |
| 7 NTERA-2细胞CD133、ABCG2、SSEA-4、TRA-1-60表达研究 | 第53-54页 |
| 8 NTERA-2细胞拟胚体形成研究 | 第54-55页 |
| 9 NTERA-2细胞和ES细胞早期凋亡检测 | 第55-57页 |
| 10 NTERA-2细胞中期凋亡检测 | 第57-58页 |
| 11 半定量RT-PCR检测sTRAIL基因表达 | 第58-59页 |
| 12 定量PCR检测sTRAIL基因的受体表达 | 第59-63页 |
| 13 Caspase-3 Western blot检测 | 第63-64页 |
| 14 体外成瘤实验结果 | 第64-69页 |
| 15 NTERA-2细胞体内三胚层分化及全能性检测 | 第69-73页 |
| 16 荷瘤SCID小鼠治疗结果 | 第73-84页 |
| 17 细胞毒实验结果 | 第84-90页 |
| 第三章 讨论 | 第90-95页 |
| 一 肿瘤特异性启动子的选择 | 第90-91页 |
| 二 可溶性TRAIL(sTRAIL)基因的细胞毒作用 | 第91-92页 |
| 三 基因治疗过程中治疗载体的选择 | 第92-95页 |
| 小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-103页 |
| 综述:肿瘤干/祖细胞研究进展 | 第103-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
| 攻读学位期间的主要研究成果 | 第142页 |
