| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 1 引言 | 第12-31页 |
| ·研究目的与意义 | 第12-13页 |
| ·相关研究进展 | 第13-29页 |
| ·反义RNA及RNA干扰技术的研究进展 | 第13-21页 |
| ·反义RNA技术 | 第13-16页 |
| ·RNA干扰技术 | 第16-21页 |
| ·根癌农杆菌Ti质粒及其标记基因的研究进展 | 第21-23页 |
| ·赤霉素与植物矮化的研究进展 | 第23-29页 |
| ·赤霉素的生物合成 | 第23-25页 |
| ·影响赤霉素生物合成的关键酶和基因 | 第25-27页 |
| ·赤霉素生物合成的调控 | 第27-28页 |
| ·赤霉素对植株矮化的影响 | 第28-29页 |
| ·研究的总体思路 | 第29-31页 |
| 2 植物反义与RNAi表达载体的构建 | 第31-56页 |
| ·植物NtGA20ox基因反义与RNAi载体构建 | 第31-45页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·菌株、质粒及植物材料 | 第31页 |
| ·酶和试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-41页 |
| ·总RNA的提取 | 第31-33页 |
| ·RNA的RT-PCR | 第33-34页 |
| ·PCR产物重组入puc118载体 | 第34-35页 |
| ·DNA序列测序及分析 | 第35页 |
| ·质粒提取 | 第35页 |
| ·农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·液氮冻融法直接转化农杆菌 | 第36页 |
| ·表达载体中插入的基因片段的引物设计及扩增 | 第36-37页 |
| ·扩增产物的克隆及测序 | 第37页 |
| ·NtGA20ox基因反义植物表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·NtGA20ox基因RNAi植物表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·总RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·PCR检测目的基因阳性克隆 | 第42页 |
| ·目的基因的序列分析 | 第42-43页 |
| ·含特异酶切位点插入片段阳性克隆的PCR及测序 | 第43页 |
| ·反义载体pBIantiW的PCR及酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·RNAi载体pBIRNAiW的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·表达载体导入根癌农杆菌LBA4404及其鉴定 | 第45页 |
| ·转基因植物PttGA20ox基因反义与RNAi载体构建 | 第45-54页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-50页 |
| ·目的基因片段的PCR引物设计及扩增 | 第45-46页 |
| ·扩增产物的克隆及测序 | 第46页 |
| ·中间载体pBIbarM的构建 | 第46页 |
| ·PttGA20ox基因反义植物表达载体的构建 | 第46页 |
| ·PttGA20ox基因RNAi栽体的构建 | 第46-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·含特异酶切位点插入片段阳性克隆的PCR及测序 | 第50页 |
| ·目的基因PttGA20ox的序列分析 | 第50-52页 |
| ·中间载体pBIbarM的PCR及酶切鉴定 | 第52页 |
| ·反义载体pBIbarantiG的PCR及酶切鉴定 | 第52页 |
| ·RNAi载体pBIbarRNAiG的酶切鉴定 | 第52-54页 |
| ·表达载体导入根癌农杆菌LBA4404及其鉴定 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 3 农杆菌介导表达载体的遗传转化 | 第56-73页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·农杆菌与质粒 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·处理方法 | 第56-58页 |
| ·植物材料的处理 | 第56-57页 |
| ·农杆菌的活化培养 | 第57页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化程序 | 第57-58页 |
| ·基本培养基配方 | 第58页 |
| ·转化体系中抗生素与除草剂浓度实验 | 第58-60页 |
| ·不同浓度对农杆菌的抑制 | 第58-59页 |
| ·不同浓度对叶片不定芽分化的影响 | 第59页 |
| ·不同浓度对茎段增殖的影响 | 第59页 |
| ·不同浓度对组培苗生根的影响 | 第59页 |
| ·评价指标 | 第59-60页 |
| ·影响转化效果的因素筛选 | 第60页 |
| ·预培养时间 | 第60页 |
| ·菌液侵染时间 | 第60页 |
| ·菌液浓度 | 第60页 |
| ·共培养时间 | 第60页 |
| ·延迟选择 | 第60页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)浓度 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-71页 |
| ·转化体系中抗生素与除草剂浓度优化的研究 | 第60-65页 |
| ·不同浓度对农杆菌的抑制 | 第60-61页 |
| ·不同浓度对叶片不定芽分化的影响 | 第61-63页 |
| ·不同浓度对茎段增殖的影响 | 第63-64页 |
| ·不同浓度对组培苗生根的影响 | 第64-65页 |
| ·影响转化效果的因素的研究 | 第65-71页 |
| ·预培养时间 | 第65-66页 |
| ·菌液侵染时间 | 第66-67页 |
| ·菌液浓度 | 第67-68页 |
| ·共培养时间 | 第68-69页 |
| ·延迟选择 | 第69-70页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)浓度 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 4 转基因植株的分子检测与鉴定 | 第73-85页 |
| ·材料 | 第73页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·菌株与质粒 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·主要仪器设备 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-79页 |
| ·转基因植株叶片再分化的Kan和Glu抗性鉴定 | 第73页 |
| ·转基因植株总DNA的大量提取 | 第73-75页 |
| ·PCR扩增检测 | 第75-76页 |
| ·Southern-blot分析 | 第76-79页 |
| ·溶液配制 | 第76-77页 |
| ·DIG-DNA探针的制备 | 第77-78页 |
| ·转化植株基因组DNA酶切 | 第78页 |
| ·凝胶电泳 | 第78页 |
| ·凝胶转膜及固定 | 第78-79页 |
| ·杂交 | 第79页 |
| ·洗膜 | 第79页 |
| ·显色反应 | 第79页 |
| ·结果与分析 | 第79-84页 |
| ·转基因植株叶片再分化能力 | 第79-80页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第80-81页 |
| ·转反义NtGA20ox基因与转反向重复NtGA20ox基因的PCR鉴定 | 第80-81页 |
| ·转反义pttGA20ox基因与转反向重复pttGA20ox基因的PCR鉴定 | 第81页 |
| ·转基因植株的Southern杂交分析 | 第81-84页 |
| ·转基因烟草AW的Southern杂交分析 | 第81-82页 |
| ·转基因烟草RW的Southern杂交分析 | 第82-83页 |
| ·转基因烟草AG的Southern杂交分析 | 第83页 |
| ·转基因烟草RG的Southern杂交分析 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| 5.转基因植株的形态功能变化和激素分析 | 第85-105页 |
| ·材料 | 第85页 |
| ·植物材料 | 第85页 |
| ·实验材料和试剂 | 第85页 |
| ·主要仪器设备 | 第85页 |
| ·方法 | 第85-90页 |
| ·生长测定 | 第85-86页 |
| ·转基因组培苗表型变化测定 | 第85页 |
| ·转基因植株移栽方法 | 第85-86页 |
| ·移栽苗生长测定方法及指标 | 第86页 |
| ·切片及细胞学比较 | 第86-88页 |
| ·溶液配制 | 第86-87页 |
| ·石蜡切片法 | 第87-88页 |
| ·内源激素含量测定 | 第88-90页 |
| ·溶液配制 | 第88页 |
| ·激素测定方法 | 第88-90页 |
| ·喷施外源赤霉素对矮化植株形态的影响 | 第90页 |
| ·结果与分析 | 第90-102页 |
| ·转基因组培苗的表型变化 | 第90-91页 |
| ·转基因烟草AW、RW的表型变化 | 第90页 |
| ·转基因烟草AG、RG的表型变化 | 第90-91页 |
| ·转基因植株的移栽 | 第91-92页 |
| ·移栽苗的生长测定 | 第92-94页 |
| ·转基因烟草AW、RW的生长测定 | 第92-93页 |
| ·转基因烟草AG、RG的生长测定 | 第93-94页 |
| ·切片及细胞学比较分析 | 第94-99页 |
| ·内源激素含量测定分析 | 第99-101页 |
| ·喷施外源赤霉素对矮化植株形态的影响 | 第101-102页 |
| ·讨论 | 第102-105页 |
| 6 结论 | 第105-107页 |
| 图版1 | 第107-108页 |
| 图版2 | 第108-109页 |
| 图版3 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-117页 |
| 个人简介 | 第117-118页 |
| 导师简介 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120页 |
