| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·课题的提出及研究的目的和内容 | 第13-14页 |
| ·前人研究进展 | 第14-24页 |
| ·植物 DNA分子标记研究进展 | 第14-18页 |
| ·DNA分子标记 | 第14页 |
| ·RAPD | 第14-15页 |
| ·RFLP | 第15-16页 |
| ·AFLP | 第16页 |
| ·SSR | 第16-17页 |
| ·IRAP和 REMAP方法 | 第17-18页 |
| ·植物反转录转座子的研究进展 | 第18-22页 |
| ·植物反转录转座子的结构与分类 | 第18-19页 |
| ·反转录转座子的转座活性 | 第19-20页 |
| ·反转录转座子对植物基因组结构和进化的影响 | 第20-22页 |
| ·柑橘类植物遗传进化关系研究进展 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·试验材料 | 第24-25页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第25-26页 |
| ·常用试剂及其配制方法 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-38页 |
| ·基因组 DNA提取 | 第26-27页 |
| ·RAPD-PCR扩增方法 | 第27-29页 |
| ·引物 | 第27-28页 |
| ·RAPD反应体系的优化 | 第28页 |
| ·RAPD-PCR扩增程序 | 第28页 |
| ·2%琼脂糖凝胶(EB染色)检测 | 第28-29页 |
| ·RAPD特征片段回收、克隆与测序 | 第29-32页 |
| ·特征片段回收纯化 | 第29页 |
| ·特征片段连接载体 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第30页 |
| ·目标片段转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第31页 |
| ·目标片段测序 | 第31-32页 |
| ·染色体步移方法(Chromosome Walking)扩增特征片段侧翼序列 | 第32-35页 |
| ·基因组 DNA提取 | 第32页 |
| ·基因组 DNA的酶切建库与纯化 | 第32页 |
| ·接头与 DNA酶切片段的连接 | 第32-33页 |
| ·接头连接 | 第33页 |
| ·特征片段侧翼序列染色体步移的引物设计 | 第33页 |
| ·染色体步移第一轮 PCR反应 | 第33-34页 |
| ·染色体步移第二轮 PCR反应 | 第34-35页 |
| ·扩增产物的回收、克隆测序 | 第35页 |
| ·PCR-Southern杂交方法 | 第35-37页 |
| ·PCR-Southern杂交样品准备及电泳 | 第35页 |
| ·Southern转膜 | 第35-36页 |
| ·DIG标记探针及标记效率检测 | 第36-37页 |
| ·Southern杂交 | 第37页 |
| ·测序结果分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-53页 |
| ·OPA08 PCR稳定扩增条件优化 | 第38-41页 |
| ·DNA提取与检测 | 第38页 |
| ·RAPD技术体系优化 | 第38-41页 |
| ·Taq酶浓度 | 第38-39页 |
| ·Mg~(2+)浓度 | 第39-40页 |
| ·引物浓度 | 第40-41页 |
| ·dNTP浓度 | 第41页 |
| ·优化的RAPD反应体系 | 第41页 |
| ·柑橘类植物 OPA08扩增特征条带回收与测序分析 | 第41-53页 |
| ·不同种类柑橘植物 OPA08引物的RAPD扩增特征带 | 第41-43页 |
| ·特征片段的PCR-Southern杂交分析 | 第43-45页 |
| ·探针标记结果 | 第43页 |
| ·甜橙OPA08-280bp特征带PCR-Southern杂交结果 | 第43-44页 |
| ·宜昌橙OPA08-280bp特征带 PCR-Southern杂交结果 | 第44-45页 |
| ·特征条带回收与测序分析 | 第45-50页 |
| ·特征条带聚类分析 | 第45-47页 |
| ·特征带OPA08-310bp序列比对 | 第47页 |
| ·特征带OPA08-280bp序列比对 | 第47-50页 |
| ·特征片段侧翼序列分析 | 第50-51页 |
| ·染色体步移文库构建 | 第50页 |
| ·染色体步移扩增结果 | 第50-51页 |
| ·特征片段与 GeneBank同源信息检索 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-59页 |
| ·在 DNA提取过程中应注意的问题 | 第53页 |
| ·RAPD实验技术的稳定性 | 第53-54页 |
| ·PCR-Southern杂交的意义 | 第54-55页 |
| ·RAPD引物OPA08扩增带在柑橘类植物中的生物学意义 | 第55-56页 |
| ·反转录转座子与柑橘植物进化的关系 | 第56页 |
| ·柑橘属及其近缘属植物之间的关系 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录一 特征片段测序序列命名对照表 | 第67-68页 |
| 附录二 RAPD扩增特征片段测序序列 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
