| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 疱疹病毒概述 | 第12页 |
| 2 鸭瘟概述 | 第12-16页 |
| ·病原学概述 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·临床症状 | 第14页 |
| ·分子生物学概述: | 第14-16页 |
| ·α-疱疹病毒的基因组特征 | 第14页 |
| ·DPV研究进展 | 第14-15页 |
| ·病毒基因的转录 | 第15页 |
| ·病毒的装配和释放 | 第15页 |
| ·病毒表达的蛋白质 | 第15-16页 |
| 3 疱疹病毒UL33基因的研究进展 | 第16-18页 |
| ·疱疹病毒UL33基因及其编码蛋白的特性 | 第16-17页 |
| ·UL33基因特性 | 第16页 |
| ·编码蛋白的特性 | 第16-17页 |
| ·UL33编码蛋白的功能 | 第17-18页 |
| ·在DNA裂解和包装中的作用 | 第17页 |
| ·在形成完整衣壳中的作用 | 第17-18页 |
| ·与pUL15、pUL28之间的作用 | 第18页 |
| ·与pUL32之间的关系 | 第18页 |
| ·结语 | 第18页 |
| 4 UL33基因在鸭瘟中的研究 | 第18-19页 |
| 5 实验的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 鸭瘟病毒UL33基因T克隆及生物信息学分析 | 第20-34页 |
| 1 材料与方法 | 第20-24页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌株/毒株/载体 | 第20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第20-21页 |
| ·主要使用的信息分析软件 | 第21页 |
| ·其他 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-24页 |
| ·基因比对 | 第21页 |
| ·病毒的增殖和病毒基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·DPV UL33基因的引物设计 | 第22页 |
| ·DPV UL33基因的PCR扩增 | 第22页 |
| ·PCR产物的回收 | 第22-23页 |
| ·目的基因的连接及转化 | 第23-24页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第24页 |
| ·DPV UL33基因序列测定 | 第24页 |
| ·DPV UL33基因的生物信息学分析 | 第24页 |
| 2 结果 | 第24-31页 |
| ·DPV UL33基因的初步判定 | 第24-25页 |
| ·DPV UL33基因的克隆、测序 | 第25-31页 |
| ·核酸序列和蛋白质序列基本分析 | 第26页 |
| ·同源性分析 | 第26-28页 |
| ·进化树分析 | 第28页 |
| ·跨膜区、磷酸化位点、N-糖基化位点、信号肽和疏水性预测 | 第28-30页 |
| ·二级和三级结构分析 | 第30-31页 |
| 3.讨论 | 第31-34页 |
| ·UL33基因的引物设计 | 第31页 |
| ·生物信息学 | 第31-32页 |
| ·序列生物信息学 | 第32页 |
| ·蛋白质生物信息学 | 第32页 |
| ·蛋白功能预测 | 第32-34页 |
| 第三章 鸭瘟病毒UL33基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第34-49页 |
| 1 材料与方法 | 第34-42页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·菌株/毒株/载体/实验动物 | 第34页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第34-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35-36页 |
| ·其它 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-42页 |
| ·UL33基因的亚克隆 | 第36-38页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第38-39页 |
| ·UL33表达蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| ·免疫兔血清的Western Blotting检测 | 第41页 |
| ·抗体IgG的粗提和纯化 | 第41-42页 |
| 2 实验结果 | 第42-46页 |
| ·重组表达质粒pET-32/UL33的构建 | 第42页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第42-44页 |
| ·重组蛋白基本诱导表达 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白IPTG浓度诱导条件优化 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白表达时间条件优化 | 第44页 |
| ·UL33重组蛋白多克隆抗体琼扩结果 | 第44-45页 |
| ·免疫印迹 | 第45页 |
| ·抗体IgG的粗提和纯化 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-49页 |
| ·外源基因融合表达的意义 | 第46-47页 |
| ·表达载体和宿主菌 | 第47页 |
| ·诱导表达 | 第47-48页 |
| ·抗血清的制备 | 第48-49页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL33基因转录时相分析和蛋白细胞定位 | 第49-68页 |
| 1 材料与方法 | 第49-54页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·菌株/毒株/实验动物 | 第49页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第49-50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-54页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的培养和病毒接种 | 第50页 |
| ·转录时相 | 第50-52页 |
| ·间接免疫荧光 | 第52-54页 |
| 2 实验结果 | 第54-64页 |
| ·转录时相 | 第54-61页 |
| ·引物验证 | 第54-55页 |
| ·内参引物检测样品 | 第55-56页 |
| ·UL33设计引物检测样品 | 第56-57页 |
| ·数据统计分析 | 第57-61页 |
| ·蛋白细胞定位 | 第61-64页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV UL33基因产物 | 第61-62页 |
| ·特异性实验 | 第62页 |
| ·DPV UL33基因产物细胞定位的动态监测 | 第62-64页 |
| 3 讨论 | 第64-68页 |
| ·转录时相 | 第64-66页 |
| ·转录时相的方法研究 | 第64-65页 |
| ·关于DPV UL33基因的转录时相分析 | 第65-66页 |
| ·蛋白细胞定位 | 第66-68页 |
| ·蛋白定位的研究方法 | 第66页 |
| ·病毒感染DEF后UL33蛋白的细胞定位分析 | 第66-67页 |
| ·关于病毒感染DEF后UL33蛋白细胞定位的时相分析 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第76页 |
