| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-15页 |
| 目录 | 第15-18页 |
| 1 引言 | 第18-36页 |
| ·植物韧皮部结构概述 | 第18-22页 |
| ·韧皮部基本结构 | 第18-19页 |
| ·韧皮部物质转运机理—压力流动学说 | 第19-20页 |
| ·韧皮液采集方法 | 第20-22页 |
| ·植物韧皮液内RNA介导的信号调控 | 第22-27页 |
| ·类病毒或RNA病毒 | 第22-23页 |
| ·植物内源RNA | 第23-25页 |
| ·小RNA | 第25-27页 |
| ·植物韧皮液内蛋白介导的信号调控 | 第27-30页 |
| ·韧皮部RNA与蛋白运输机制 | 第30-33页 |
| ·韧皮部长距离信号转导与逆境响应 | 第33-34页 |
| ·本文的研究内容、目的意义 | 第34-36页 |
| 2 南瓜韧皮液内mRNA结合蛋白的分离纯化及蛋白质组分析 | 第36-51页 |
| ·材料与方法 | 第38-40页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·南瓜韧皮液的收集 | 第38页 |
| ·南瓜韧皮液蛋白的阴离子亲和交换 | 第38页 |
| ·Poly(U)亲和柱纯化分离mRNA结合蛋白 | 第38-39页 |
| ·Trypsin胶内酶切及LC-MS/MS分析 | 第39页 |
| ·Western印迹分析 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-47页 |
| ·南瓜韧皮液内RNA结合蛋白的分离纯化 | 第40-41页 |
| ·韧皮液内mRNA结合蛋白的分析 | 第41-42页 |
| ·CmRBP50的验证 | 第42-47页 |
| ·讨论 | 第47-51页 |
| 3 CmRBP50磷酸化位点的分析及其对于CmRBP50核糖核蛋白(RNP)复合体形成的影响 | 第51-79页 |
| ·材料与方法 | 第52-64页 |
| ·植物材料 | 第52-53页 |
| ·载体构建 | 第53-54页 |
| ·常规方法 | 第54-58页 |
| ·RACE合成全长cDNA | 第58-60页 |
| ·点突变构建CmRBP50突变蛋白 | 第60-61页 |
| ·基因枪转化 | 第61页 |
| ·本氏烟浸润法表达重组蛋白 | 第61-62页 |
| ·植物重组蛋白纯化 | 第62页 |
| ·Western | 第62-63页 |
| ·蛋白Overlay | 第63页 |
| ·Pull-down与免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation) | 第63-64页 |
| ·Pro-Q Diamond、Emerald染色,Sypro Ruby染色 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-76页 |
| ·翻译后修饰对于基于CmRBP50RNP形成的重要性 | 第64-68页 |
| ·CmRBP50磷酸化位点的鉴定 | 第68-71页 |
| ·Ser223、438、440与444磷酸化修饰对于CmRBP50RNP的形成起着重要作用 | 第71-74页 |
| ·CmRBP50直接互作蛋白的克隆、纯化与鉴定 | 第74-75页 |
| ·CmRBP50 C端磷酸化修饰对于其与CmPP16,CmGTPbP,CmPSPL互作的影响 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-79页 |
| 4 CmRBP50磷酸化激酶的分离鉴定 | 第79-91页 |
| ·材料与方法 | 第80-83页 |
| ·植物材料 | 第80页 |
| ·CmRBP50大肠杆菌体外重组蛋白的表达和纯化 | 第80-81页 |
| ·南瓜维管束蛋白与韧皮液蛋白的提取 | 第81页 |
| ·利用FPLC进行阴离子、阳离子吸附交换分离维管束蛋白与韧皮液蛋白 | 第81-82页 |
| ·胶内磷酸化 | 第82-83页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-88页 |
| ·CmRBP50体外重组蛋白的大量纯化 | 第83-84页 |
| ·维管束与韧皮液总蛋白中CmRBP50磷酸化激酶的分离鉴定 | 第84-87页 |
| ·FPLC分离后维管束与韧皮液蛋白中CmRBP50磷酸化激酶的分离鉴定 | 第87页 |
| ·可能的CmRBP50磷酸化激酶 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-91页 |
| 5 结论与展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-109页 |
| 附录A 常用缓冲液及培养基配方 | 第109-111页 |
| 附录B 常用化学试剂、分子生物学试剂 | 第111-113页 |
| 作者简历 | 第113页 |
