| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-25页 |
| ·山核桃研究简介 | 第14-15页 |
| ·植物嫁接研究进展 | 第15-18页 |
| ·水通道蛋白的研究进展 | 第18-22页 |
| ·水孔蛋白的发现 | 第18页 |
| ·植物水孔蛋白的分类 | 第18-19页 |
| ·水孔蛋白的结构 | 第19-20页 |
| ·植物水孔蛋白的生理功能分析 | 第20-21页 |
| ·水通道蛋白研究展望 | 第21-22页 |
| ·RACE 技术的研究进展与应用 | 第22-25页 |
| ·RACE 技术的原理 | 第22页 |
| ·RACE 技术的优点 | 第22页 |
| ·RACE 技术的局限性与改进措施 | 第22-24页 |
| ·RACE 技术的应用与展望 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-45页 |
| ·材料准备 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·试剂及来源 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-38页 |
| ·RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·总RNA 提取质量检测 | 第27页 |
| ·山核桃水通道蛋白基因3′RACE | 第27-32页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第27-28页 |
| ·目的cDNA 的扩增 | 第28页 |
| ·巢式 PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·阳性片段回收 | 第29页 |
| ·PCR 产物与T-Vector 的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞制备（CaCl_2法） | 第29-30页 |
| ·质粒转化 | 第30页 |
| ·质粒提取并进行酶切检测 | 第30-31页 |
| ·序列测定 | 第31页 |
| ·序列分析 | 第31-32页 |
| ·山核桃CcPIP 基因5’端序列 | 第32-34页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第32页 |
| ·cDNA 的纯化 | 第32-33页 |
| ·cDNA 加尾反应 | 第33页 |
| ·cDNA 加尾产物的PCR 扩增 | 第33页 |
| ·巢式 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·阳性片段回收 | 第34页 |
| ·阳性片段与pMD19-T 载体的连接 | 第34页 |
| ·将连接产物进行转化、酶切，检测片段大小 | 第34页 |
| ·提取质粒，进行酶切鉴定 | 第34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·序列比对 | 第34页 |
| ·山核桃水通道蛋白基因cDNA 全长 | 第34-37页 |
| ·山核桃总 RNA 提取 | 第34页 |
| ·mRNA 纯化 | 第34-35页 |
| ·双链cDNA 的合成 | 第35-36页 |
| ·纯化cDNA | 第36页 |
| ·引物设计与 PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·阳性片段回收 | 第37页 |
| ·阳性片段与pMD 18-T 载体的连接 | 第37页 |
| ·将连接产物进行转化、酶切，检测片段大小 | 第37页 |
| ·提取质粒，进行酶切鉴定 | 第37页 |
| ·序列测定 | 第37页 |
| ·山核桃CcPIP 基因生物信息学分析 | 第37-38页 |
| ·山核桃水通道蛋白基因时空表达分析 | 第38-40页 |
| ·材料与方法 | 第38页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·RNA 提取 | 第38-39页 |
| ·引物设计 | 第39页 |
| ·定量 RT-PCR 操作方法 | 第39-40页 |
| ·山核桃CcPIP 基因表达载体的构建与转化拟南芥 | 第40-45页 |
| ·材料与方法 | 第40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·质粒和菌株 | 第40页 |
| ·酶和试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-45页 |
| ·CcPIP 基因扩增及筛选 | 第40-41页 |
| ·pCAMBIA-1301-CcPIP 真核表达载体构建 | 第41-43页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·表达载体质粒导入农杆菌 | 第43页 |
| ·拟南芥的种植及培养 | 第43-44页 |
| ·转化菌液的培养 | 第44页 |
| ·转化拟南芥 | 第44页 |
| ·转基因种子的筛选及种植 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-55页 |
| ·RNA 提取电泳图 | 第45页 |
| ·山核桃水通道蛋白基因3′RACE | 第45-46页 |
| ·山核桃水通道蛋白基因5′RACE | 第46-47页 |
| ·山核桃水通道蛋白基因全长CDNA | 第47-48页 |
| ·山核桃CcPIP 基因的生物信息学分析 | 第48-50页 |
| ·CcPIP 基因的氨基酸组成及其理化性质 | 第48页 |
| ·山核桃CcPIP 基因跨膜区分析 | 第48页 |
| ·山核桃CcPIP 基因序列同源性分析与进化树构建 | 第48-50页 |
| ·山核桃CcPIP 基因的时空表达分析 | 第50-51页 |
| ·山核桃CcPIP 基因表达载体的构建 | 第51-55页 |
| ·中间载体的构建 | 第51-52页 |
| ·山核桃CcPIP 基因表达载体构建 | 第52-53页 |
| ·山核桃CcPIP 基因表达载体的鉴定 | 第53-54页 |
| ·表达载体测序鉴定 | 第54页 |
| ·山核桃CcPIP 基因表达载体的农杆菌转化 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
| 在读期间发表论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附表 | 第68页 |
