| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言与文献综述 | 第11-35页 |
| ·甘蔗概况 | 第11-13页 |
| ·甘蔗在农业生产中的重要性 | 第11页 |
| ·甘蔗的主要用途 | 第11-12页 |
| ·甘蔗副产品的用途 | 第12页 |
| ·甘蔗在生物领域作为转基因受体的优点 | 第12-13页 |
| ·植物基因启动子的研究 | 第13-29页 |
| ·植物基因启动子性质 | 第13页 |
| ·组成型启动子 | 第13-15页 |
| ·组织特异性启动子 | 第15-22页 |
| ·营养器官中的表达启动子 | 第15-18页 |
| ·生殖器官表达的特异启动子 | 第18-22页 |
| ·诱导型启动子 | 第22-28页 |
| ·光诱导启动子 | 第22-23页 |
| ·热诱导表达启动子 | 第23-24页 |
| ·创伤诱导启动子 | 第24页 |
| ·激素诱导表达启动子 | 第24-27页 |
| ·真菌和共生菌诱导表达启动子 | 第27-28页 |
| ·植物基因启动子的人工改造及运用前景 | 第28-29页 |
| ·甘蔗启动子的研究 | 第29-30页 |
| ·甘蔗启动子研究的重要意义 | 第29页 |
| ·甘蔗的启动子的研究进展 | 第29-30页 |
| ·甘蔗遗传转化的方法 | 第30-32页 |
| ·农杆菌介导法 | 第30-32页 |
| ·农杆菌介导的转化机理 | 第30-31页 |
| ·农杆菌转化系统的特点 | 第31-32页 |
| ·农杆菌介导植物转化技术在禾本科植物中的应用 | 第32页 |
| ·本论文研究的目的、内容和技术路线 | 第32-35页 |
| ·研究目的 | 第32-33页 |
| ·研究内容 | 第33-34页 |
| ·技术路线 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-49页 |
| ·材料与试剂 | 第35-36页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·质粒及菌种 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·PCR引物 | 第35-36页 |
| ·常用药品、培养基及其试剂的配制 | 第36页 |
| ·培养基配制 | 第36页 |
| ·溶液配制 | 第36页 |
| ·实验所用试剂配制 | 第36-37页 |
| ·总DNA提取 | 第36页 |
| ·质粒DNA提取 | 第36页 |
| ·GUS组织化学染色试剂 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-44页 |
| ·PST2A基因启动子系列缺失及缺失表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·PST2A基因启动子系列缺失 | 第37页 |
| ·PCR扩增PST2A基因启动子 | 第37-38页 |
| ·PCR产物回收 | 第38页 |
| ·目的片段与T载体的连接 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态的检测和转化方法 | 第39页 |
| ·小量提取质粒 | 第39-40页 |
| ·聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA | 第40页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·缺失表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·酶切 | 第41页 |
| ·连接 | 第41-42页 |
| ·PCBI1900、PCBI1600、PCBI1300、PCBI1100植物表达载体转化农杆菌 | 第42页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化 | 第42页 |
| ·菌株鉴定 | 第42-44页 |
| ·质粒的提取 | 第42-43页 |
| ·PCBI1900、PCBI1600、PCBI1300、PCBI1100 PCR鉴定 | 第43页 |
| ·PCBI1900、PCBI1600、PCBI1300、PCBI1100酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·PCBI1900、PCBI1600、PCBI1300、PCBI1100表达载体遗传转化甘蔗 | 第44-46页 |
| ·甘蔗转化材料及其农杆菌菌液的准备 | 第44-45页 |
| ·几种主要的甘蔗培养基 | 第44页 |
| ·甘蔗愈伤组织的培养 | 第44页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第44-45页 |
| ·农杆菌菌液浸染愈伤组织 | 第45页 |
| ·侵染后愈伤组织的共培养及洗涤 | 第45页 |
| ·预检测侵染效率 | 第45页 |
| ·浸染后的愈伤组织分化 | 第45页 |
| ·甘蔗植株的筛选培养 | 第45页 |
| ·甘蔗抗性小苗的定植 | 第45-46页 |
| ·抗性甘蔗植株的PCR检测 | 第46-47页 |
| ·甘蔗总DNA的小量提取 | 第46页 |
| ·转化甘蔗的GUS基因PCR检测 | 第46-47页 |
| ·转PCBI1900、PCBI1600、PCBI1300、PCBI1100植株GUS组织化学染色结果 | 第47页 |
| ·PCBI1900 PCBI1600表达载体遗传转化烟草 | 第47-49页 |
| ·烟草转化材料及其农杆菌菌液的准备 | 第47-48页 |
| ·烟草主要的培养基 | 第47-48页 |
| ·烟草无菌外植体的获得 | 第48页 |
| ·农杆菌介导法转化烟草 | 第48页 |
| ·农杆菌菌液的制备 | 第48页 |
| ·农杆菌菌液浸染烟草叶片 | 第48页 |
| ·侵染后烟草叶片的共培养 | 第48-49页 |
| ·浸染后的烟草叶片组织分化 | 第49页 |
| ·烟草的筛选培养 | 第49页 |
| ·烟草抗性小苗的定植 | 第49页 |
| ·抗性烟草植株的PCR检测 | 第49页 |
| ·烟草总DNA的小量提取 | 第49页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-63页 |
| ·PST2A基因启动子系列缺失及缺失表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·PST2A基因启动子系列缺失 | 第49-50页 |
| ·各表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·PCBI1900、PCBI1600、PCBI1300、PCBI1100植物表达载体的农杆菌转化和鉴定 | 第52-53页 |
| ·植物表达载体PCR鉴定 | 第52页 |
| ·植物表达载体的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·农杆菌介导的甘蔗转化 | 第53-56页 |
| ·农杆菌介导法转化甘蔗愈伤组织及甘蔗小苗分化与筛选过程 | 第53-56页 |
| ·农杆菌菌液侵染甘蔗 | 第53页 |
| ·GUS染色法检测侵染效率 | 第53页 |
| ·侵染后植株的筛选和培养 | 第53页 |
| ·抗性植株的培养 | 第53-56页 |
| ·转化甘蔗植株的分子检测 | 第56-58页 |
| ·PCR检测 | 第56-58页 |
| ·甘蔗总DNA的提取 | 第56页 |
| ·转PCBI1900抗性植株的GUS基因PCR检测 | 第56页 |
| ·转PCBI1600抗性植株的GUS基因PCR检测 | 第56-57页 |
| ·转PCBI1300抗性植株的GUS基因PCR检测 | 第57-58页 |
| ·转PCBI1100抗性植株的GUS基因PCR检测 | 第58页 |
| ·转pCBI1900、pCBI1600、pCBI1300、pCBI1100植株GUS组织化学染色结果 | 第58-60页 |
| ·农杆菌叶盘法遗传转化烟草 | 第60-62页 |
| ·烟草的PCR检测 | 第62-63页 |
| ·烟草DNA的提取 | 第62页 |
| ·转PCBI1900抗性植株的GUS基因PCR检测 | 第62页 |
| ·转PCBI1600抗性植株的GUS基因PCR检测 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| ·有关甘蔗抗性苗的转化效率和检测 | 第63页 |
| ·关于根部特异启动子 | 第63-64页 |
| ·关于GUS报告基因和检测 | 第64-65页 |
| 5. 结论 | 第65页 |
| 6. 本试验研究的后续工作 | 第65页 |
| 7. 参考文献 | 第65-73页 |
| 8. 缩写词 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
