| 中文摘要 1 | 第4-5页 |
| Abstract 1 | 第5-7页 |
| 中文摘要 2 | 第7-8页 |
| Abstract 2 | 第8-12页 |
| 缩略词中英文对照 | 第12-14页 |
| 第一章 HDAC1 调节肠道上皮细胞中干细胞标志基因的表达 | 第14-58页 |
| 1.1 引言 | 第14-23页 |
| 1.1.1 消化道生理 | 第14-15页 |
| 1.1.2 肠道干细胞(ISC) | 第15-19页 |
| 1.1.3 肠道上皮中的信号通路 | 第19-20页 |
| 1.1.4 HDAC在肠道上皮中的作用 | 第20-21页 |
| 1.1.5 超级增强子 | 第21-22页 |
| 1.1.6 本课题的研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 1.2.1 实验动物 | 第23页 |
| 1.2.2 试剂 | 第23-26页 |
| 1.2.3 设备 | 第26页 |
| 1.3 实验方法 | 第26-40页 |
| 1.3.1 小鼠结肠上皮细胞培养 | 第26-27页 |
| 1.3.2 小鼠原代角质形成细胞分离 | 第27-28页 |
| 1.3.3 细胞药物处理 | 第28页 |
| 1.3.4 RNA的提取与定量： | 第28-30页 |
| 1.3.5 Wnt-3a条件培养基 | 第30-31页 |
| 1.3.6 Wnt/β-catenin信号通路活性检测 | 第31-32页 |
| 1.3.7 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第32-34页 |
| 1.3.8 免疫荧光染色(IF) | 第34-35页 |
| 1.3.9 Western Blot | 第35-38页 |
| 1.3.10 组织化学染色 | 第38-39页 |
| 1.3.11 数据分析 | 第39-40页 |
| 1.4 结果 | 第40-50页 |
| 1.4.1 结肠上皮细胞的原代培养和鉴定 | 第40-41页 |
| 1.4.2 TSA处理影响干细胞标志基因的表达 | 第41页 |
| 1.4.3 TSA处理增加Lgr5、Ascl2、Tnfrsf19 启动子区域H3K27 乙酰化水平 | 第41-43页 |
| 1.4.4 HDAC1 调节干细胞标志基因的表达 | 第43-44页 |
| 1.4.5 抑制HDAC1 增加Lgr5、Ascl2、Tnfrsf19 启动子区域H3K27 乙酰化水平 | 第44-45页 |
| 1.4.6 HDAC1/2 对干细胞标志基因的调节作用不依赖于Wnt信号通路 | 第45-47页 |
| 1.4.7 干细胞标志基因的表达需要HDAC1和CBP的协调 | 第47-48页 |
| 1.4.8 抑制HDAC1 影响原代角质形成细胞中Lgr5 等的表达 | 第48-50页 |
| 1.5 讨论 | 第50-54页 |
| 1.6 参考文献 | 第54-58页 |
| 第二章 MicroRNA-31 在结肠肿瘤发生发展中的作用研究 | 第58-114页 |
| 2.1 引言 | 第58-65页 |
| 2.1.1 结直肠癌概述 | 第58-60页 |
| 2.1.2 MicroRNA概述 | 第60-62页 |
| 2.1.3 miR-31 概述 | 第62-64页 |
| 2.1.4 本课题的研究目的和意义 | 第64-65页 |
| 2.2 实验材料 | 第65-71页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第65-68页 |
| 2.2.2 试剂 | 第68-71页 |
| 2.2.3 仪器 | 第71页 |
| 2.3 实验方法 | 第71-93页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第71-72页 |
| 2.3.2 小鼠基因型鉴定 | 第72-73页 |
| 2.3.3 结肠炎和肠炎相关肠癌的诱导 | 第73页 |
| 2.3.4 RNA的提取与定量： | 第73-77页 |
| 2.3.5 小鼠肠道上皮细胞富集 | 第77页 |
| 2.3.6 miRNA原位杂交[143] | 第77-81页 |
| 2.3.7 快速cDNA末端扩增 | 第81-83页 |
| 2.3.8 pcDNA3.1 过表达载体的构建 | 第83-85页 |
| 2.3.9 启动子甲基化分析 | 第85-87页 |
| 2.3.10 他莫西芬诱导CreER小鼠基因组重组 | 第87-88页 |
| 2.3.11 TALEN构建MIR31 敲除细胞株 | 第88-91页 |
| 2.3.12 Transwell检测肿瘤细胞迁移 | 第91-92页 |
| 2.3.13 统计学分析 | 第92-93页 |
| 2.4 结果 | 第93-107页 |
| 2.4.1 miR-31 在小鼠各器官中的表达 | 第93-94页 |
| 2.4.2 miR-31在DSS诱导的结肠炎中表达升高 | 第94-95页 |
| 2.4.3 miR-31 在小鼠结肠肿瘤中表达显著上升 | 第95-97页 |
| 2.4.4 原位杂交显示mi R-31 由肿瘤细胞表达 | 第97-98页 |
| 2.4.5 miR-31 在人结肠癌中表达升高 | 第98-99页 |
| 2.4.6 RACE阐明小鼠Mir31hg结构 | 第99-101页 |
| 2.4.7 肿瘤发生过程中Mir31hg启动子Cp G岛甲基化状态保持不变 | 第101-102页 |
| 2.4.8 敲除Mir31 对肠炎和肠道肿瘤发生的影响 | 第102-105页 |
| 2.4.9 敲除Mir31 促进肿瘤细胞迁移 | 第105-107页 |
| 2.5 讨论 | 第107-110页 |
| 2.5.1 miR-31 作为上皮组织特异性的mi RNA在结肠癌中表达上升 | 第107-108页 |
| 2.5.2 Mir31hg基因 | 第108页 |
| 2.5.3 miR-31 抑制结肠肿瘤的发生 | 第108-110页 |
| 2.6 参考文献 | 第110-114页 |
| 附录 | 第114-125页 |
| 附1 本论文中用到的常用试剂和缓冲液 | 第114-121页 |
| 附2 本论文中所用到的寡核苷酸序列 | 第121-123页 |
| 附3 Mir31hg成熟转录本序列 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 博士期间发表论文 | 第127页 |
