| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 恩拉霉素 | 第9-13页 |
| 1.1.1 恩拉霉素的结构及理化性质 | 第9-10页 |
| 1.1.2 恩拉霉素的作用机理 | 第10-11页 |
| 1.1.3 恩拉霉素的生物合成方式 | 第11-12页 |
| 1.1.4 恩拉霉素的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2 恩拉霉素的检测方法 | 第13-14页 |
| 1.2.1 国标法检测 | 第13页 |
| 1.2.2 干燥滤纸片法检测 | 第13-14页 |
| 1.2.3 高效液相检测 | 第14页 |
| 1.2.4 薄层层析紫外检测 | 第14页 |
| 1.3 恩拉霉素的应用及生产情况 | 第14-17页 |
| 1.3.1 恩拉霉素的应用 | 第14-16页 |
| 1.3.2 恩拉霉素的市场及生产情况 | 第16-17页 |
| 1.4 课题的研究意义及研究内容 | 第17-19页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第17-18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒及特点 | 第19-20页 |
| 2.1.3 引物 | 第20-22页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.5 实验设备与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.6 主要溶液与缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.7 培养基 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-40页 |
| 2.2.1 菌种培养及保藏 | 第26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.3 细菌DNA的小量提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4 Streptomyces fungicidicus对阿普拉霉素和硫链丝菌素的抗性考察 | 第28页 |
| 2.2.5 阻断endA的重组质粒的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.6 其它重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.7 大肠杆菌ET12567与Streptomyces fungicidicus接合转移 | 第32-34页 |
| 2.2.8 双交换阻断株的筛选 | 第34页 |
| 2.2.9 链霉菌的发酵培养 | 第34页 |
| 2.2.10 以枯草芽孢杆菌为指示菌对产恩拉霉素产量的检测 | 第34-36页 |
| 2.2.11 改造菌株的抗性筛选 | 第36-37页 |
| 2.2.12 改造菌株的基因回补 | 第37-38页 |
| 2.2.13 菌株正调控基因的过表达 | 第38-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-62页 |
| 3.1 结构基因遗传改造实验 | 第40-52页 |
| 3.1.1 Streptomyces fungicidicus对阿普拉霉素及硫链丝菌素的抗性考察 | 第40-41页 |
| 3.1.2 tsr基因部分替换nrps基因 | 第41-47页 |
| 3.1.3 抗性筛选 | 第47-49页 |
| 3.1.4 基因回补 | 第49-52页 |
| 3.1.5 发酵及测活 | 第52页 |
| 3.2 筛选菌株S.funD-41的构建 | 第52-57页 |
| 3.2.1 筛选菌株的遗传改造及验证 | 第53-54页 |
| 3.2.2 高产菌株的筛选 | 第54-55页 |
| 3.2.3 发酵及测活 | 第55-57页 |
| 3.3 调控基因对恩拉霉素产量的影响 | 第57-62页 |
| 3.3.1 调控基因的敲除 | 第57-60页 |
| 3.3.2 orf22基因的过表达 | 第60-62页 |
| 4 结论 | 第62-63页 |
| 4.1 全文结论 | 第62页 |
| 4.2 论文的创新点 | 第62页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第62-63页 |
| 5 展望 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-69页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第69-70页 |
| 8 致谢 | 第70页 |
