| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩写符号 | 第10-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-34页 |
| 1. 纳米技术的发展和应用及常见的纳米材料 | 第14-16页 |
| 1.1 纳米技术的发展和应用 | 第14-15页 |
| 1.2 常见纳米材料分类 | 第15-16页 |
| 1.2.1 碳纳米管材料 | 第15-16页 |
| 1.2.2 金属氧化物纳米材料 | 第16页 |
| 2. 纳米材料的毒性研究进展 | 第16-21页 |
| 2.1 纳米材料进出细胞的方式和在细胞中的定位 | 第16-19页 |
| 2.2 纳米材料的细胞毒性和基因毒性 | 第19-20页 |
| 2.3 纳米材料对特定细胞长期作用的影响 | 第20-21页 |
| 3. 纳米材料与表观遗传 | 第21-23页 |
| 3.1 表观遗传学 | 第21-22页 |
| 3.2 组蛋白表观遗传 | 第22页 |
| 3.3 常见的组蛋白修饰 | 第22-23页 |
| 3.4 纳米材料诱导的表观遗传变化 | 第23页 |
| 4. 细胞对于纳米材料的反馈调控机制 | 第23-32页 |
| 4.1 细胞周期 | 第23-28页 |
| 4.1.1 细胞周期进程 | 第23-24页 |
| 4.1.2 细胞周期调控蛋白 | 第24-26页 |
| 4.1.3 细胞周期检验点的功能 | 第26-27页 |
| 4.1.4 细胞周期相关调控基因 | 第27页 |
| 4.1.5 纳米材料作用造成的细胞周期紊乱 | 第27-28页 |
| 4.2 活性氧类 | 第28-29页 |
| 4.3 溶酶体 | 第29-32页 |
| 5. 研究目的及意义 | 第32-34页 |
| 第二章 材料和方法 | 第34-48页 |
| 1. 实验材料 | 第34-41页 |
| 1.1 纳米材料 | 第34-35页 |
| 1.1.1 二氧化钛(TiO_2 NPs) | 第34页 |
| 1.1.2 多壁碳纳米管(MWCNT) | 第34页 |
| 1.1.3 单壁碳纳米管(SWCNT) | 第34-35页 |
| 1.2 细胞系 | 第35页 |
| 1.3 培养基 | 第35页 |
| 1.4 引物序列 | 第35-36页 |
| 1.4.1 反转录荧光定量RT-qPCR引物序列 | 第35-36页 |
| 1.4.2 ChIP-qPCR引物序列 | 第36页 |
| 1.5 实验所用仪器和型号 | 第36-37页 |
| 1.6 实验所需药品 | 第37页 |
| 1.7 实验所需溶液及缓冲液配方 | 第37-40页 |
| 1.8 实验所需试剂盒及抗体 | 第40-41页 |
| 1.8.1 试剂盒 | 第40页 |
| 1.8.2 抗体 | 第40-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-48页 |
| 2.1 细胞相差显微镜观察 | 第41页 |
| 2.2 细胞活力检测MTS | 第41页 |
| 2.3 细胞周期分析 | 第41-42页 |
| 2.4 纳米材料的摄入性分析 | 第42页 |
| 2.5 活性氧检测 | 第42-43页 |
| 2.6 溶酶体LMD检测 | 第43页 |
| 2.7 蛋白质免疫印迹Western-blotting | 第43-45页 |
| 2.7.1 细胞蛋白样品提取和制备 | 第43-44页 |
| 2.7.2 蛋白SDS-PAGE电泳 | 第44页 |
| 2.7.3 蛋白转膜 | 第44-45页 |
| 2.7.4 蛋白封阻及抗体孵育 | 第45页 |
| 2.7.5 化学发光ECL显色 | 第45页 |
| 2.8 反转录荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 2.8.1 细胞样品RNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.8.2 反转录为cDNA第一链 | 第46页 |
| 2.8.3 实时荧光定量PCR检测 | 第46页 |
| 2.9 染色质免疫共沉淀qPCR | 第46-48页 |
| 2.9.1 甲醛交联 | 第47页 |
| 2.9.2 抗体孵育染色质洗脱 | 第47页 |
| 2.9.3 DNA片段纯化回收 | 第47页 |
| 2.9.4 目的片段实时荧光定量PCR检测 | 第47-48页 |
| 第三章 结果与分析 | 第48-64页 |
| 1. 透射电镜下三种纳米材料的形态表征 | 第48页 |
| 2. 纳米材料处理下的细胞生存力 | 第48-50页 |
| 3. A549细胞对纳米材料的吸收摄入分析 | 第50-52页 |
| 4. 纳米材料导致的A549细胞内活性氧水平的变化 | 第52-54页 |
| 5. 纳米材料导致的A549细胞溶酶体膜通透性变化 | 第54-55页 |
| 6. 纳米材料导致的A549细胞DNA损伤 | 第55-56页 |
| 7. A549细胞组蛋白H3K9me2,H3K9ac,H4K5ac和H3K4me2的表达量分析 | 第56-57页 |
| 8. 纳米材料导致的A549细胞周期的改变 | 第57-59页 |
| 9. A549细胞周期相关基因的表达量分析 | 第59-61页 |
| 10. 增殖细胞核抗原PCNA基因的表达量分析 | 第61-62页 |
| 11. PCNA基因启动子和转录部分区域的组蛋白H3K9me2的修饰状况分析 | 第62-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-67页 |
| 1. 不同纳米材料对细胞的毒性影响取决于材料类型、处理浓度以及处理时间,并且在移除纳米材料后,细胞活力的恢复能力不同 | 第64-65页 |
| 2. 表观遗传修饰参与纳米材料所诱导细胞核压力应答过程 | 第65-66页 |
| 3. 总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 在读期间发表论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
