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纳米材料处理A549细胞诱导的毒性效应和组蛋白修饰变化的研究

摘要第5-7页
Abstract第7-9页
缩写符号第10-14页
第一章 前言第14-34页
    1. 纳米技术的发展和应用及常见的纳米材料第14-16页
        1.1 纳米技术的发展和应用第14-15页
        1.2 常见纳米材料分类第15-16页
            1.2.1 碳纳米管材料第15-16页
            1.2.2 金属氧化物纳米材料第16页
    2. 纳米材料的毒性研究进展第16-21页
        2.1 纳米材料进出细胞的方式和在细胞中的定位第16-19页
        2.2 纳米材料的细胞毒性和基因毒性第19-20页
        2.3 纳米材料对特定细胞长期作用的影响第20-21页
    3. 纳米材料与表观遗传第21-23页
        3.1 表观遗传学第21-22页
        3.2 组蛋白表观遗传第22页
        3.3 常见的组蛋白修饰第22-23页
        3.4 纳米材料诱导的表观遗传变化第23页
    4. 细胞对于纳米材料的反馈调控机制第23-32页
        4.1 细胞周期第23-28页
            4.1.1 细胞周期进程第23-24页
            4.1.2 细胞周期调控蛋白第24-26页
            4.1.3 细胞周期检验点的功能第26-27页
            4.1.4 细胞周期相关调控基因第27页
            4.1.5 纳米材料作用造成的细胞周期紊乱第27-28页
        4.2 活性氧类第28-29页
        4.3 溶酶体第29-32页
    5. 研究目的及意义第32-34页
第二章 材料和方法第34-48页
    1. 实验材料第34-41页
        1.1 纳米材料第34-35页
            1.1.1 二氧化钛(TiO_2 NPs)第34页
            1.1.2 多壁碳纳米管(MWCNT)第34页
            1.1.3 单壁碳纳米管(SWCNT)第34-35页
        1.2 细胞系第35页
        1.3 培养基第35页
        1.4 引物序列第35-36页
            1.4.1 反转录荧光定量RT-qPCR引物序列第35-36页
            1.4.2 ChIP-qPCR引物序列第36页
        1.5 实验所用仪器和型号第36-37页
        1.6 实验所需药品第37页
        1.7 实验所需溶液及缓冲液配方第37-40页
        1.8 实验所需试剂盒及抗体第40-41页
            1.8.1 试剂盒第40页
            1.8.2 抗体第40-41页
    2 实验方法第41-48页
        2.1 细胞相差显微镜观察第41页
        2.2 细胞活力检测MTS第41页
        2.3 细胞周期分析第41-42页
        2.4 纳米材料的摄入性分析第42页
        2.5 活性氧检测第42-43页
        2.6 溶酶体LMD检测第43页
        2.7 蛋白质免疫印迹Western-blotting第43-45页
            2.7.1 细胞蛋白样品提取和制备第43-44页
            2.7.2 蛋白SDS-PAGE电泳第44页
            2.7.3 蛋白转膜第44-45页
            2.7.4 蛋白封阻及抗体孵育第45页
            2.7.5 化学发光ECL显色第45页
        2.8 反转录荧光定量PCR第45-46页
            2.8.1 细胞样品RNA的提取第45-46页
            2.8.2 反转录为cDNA第一链第46页
            2.8.3 实时荧光定量PCR检测第46页
        2.9 染色质免疫共沉淀qPCR第46-48页
            2.9.1 甲醛交联第47页
            2.9.2 抗体孵育染色质洗脱第47页
            2.9.3 DNA片段纯化回收第47页
            2.9.4 目的片段实时荧光定量PCR检测第47-48页
第三章 结果与分析第48-64页
    1. 透射电镜下三种纳米材料的形态表征第48页
    2. 纳米材料处理下的细胞生存力第48-50页
    3. A549细胞对纳米材料的吸收摄入分析第50-52页
    4. 纳米材料导致的A549细胞内活性氧水平的变化第52-54页
    5. 纳米材料导致的A549细胞溶酶体膜通透性变化第54-55页
    6. 纳米材料导致的A549细胞DNA损伤第55-56页
    7. A549细胞组蛋白H3K9me2,H3K9ac,H4K5ac和H3K4me2的表达量分析第56-57页
    8. 纳米材料导致的A549细胞周期的改变第57-59页
    9. A549细胞周期相关基因的表达量分析第59-61页
    10. 增殖细胞核抗原PCNA基因的表达量分析第61-62页
    11. PCNA基因启动子和转录部分区域的组蛋白H3K9me2的修饰状况分析第62-64页
第四章 讨论第64-67页
    1. 不同纳米材料对细胞的毒性影响取决于材料类型、处理浓度以及处理时间,并且在移除纳米材料后,细胞活力的恢复能力不同第64-65页
    2. 表观遗传修饰参与纳米材料所诱导细胞核压力应答过程第65-66页
    3. 总结第66-67页
参考文献第67-77页
在读期间发表论文第77-78页
致谢第78页

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