| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 前言 | 第11页 |
| 1.2 异丁醇生物合成研究现状 | 第11-16页 |
| 1.2.1 微生物合成异丁醇的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2.2 酿酒酵母合成异丁醇的研究现状 | 第12-16页 |
| 1.3 本论文的研究思路 | 第16-19页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-26页 |
| 2.1.1 引物、质粒和菌种 | 第19-21页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要药品 | 第22页 |
| 2.1.4 主要溶液与培养基 | 第22-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.2 大肠杆菌细胞感受态的转化 | 第26-27页 |
| 2.2.3 PCR扩增反应 | 第27页 |
| 2.2.4 酚氯仿纯化DNA | 第27-28页 |
| 2.2.5 DNA的限制性内切酶消化 | 第28页 |
| 2.2.6 DNA连接反应 | 第28-29页 |
| 2.2.7 CTAB法提取大肠杆菌质粒 | 第29页 |
| 2.2.8 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.2.9 酵母细胞的醋酸锂转化法 | 第29-30页 |
| 2.2.10 酵母染色体的快速分离 | 第30页 |
| 2.2.11 二倍体酵母的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.12 甲基磺酸乙酯(EMS)诱变 | 第31页 |
| 2.2.13 Dilution | 第31页 |
| 2.3 发酵条件 | 第31-32页 |
| 2.4 发酵样品的测定方法 | 第32-35页 |
| 2.4.1 酵母菌株生长曲线的测定 | 第32页 |
| 2.4.2 DNS法测定发酵液中残糖量 | 第32-33页 |
| 2.4.3 发酵液中异丁醇的测定 | 第33页 |
| 2.4.4 发酵液中乙醇的测定 | 第33-35页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第35-59页 |
| 3.1 过量表达ZWF1基因对酿酒酵母异丁醇产量影响的研究 | 第35-41页 |
| 3.1.1 质粒YCplac22-ZWF1的构建 | 第36-37页 |
| 3.1.2 过量表达ZWF1基因的酿酒酵母菌株的构建 | 第37-38页 |
| 3.1.3 过量表达ZWF1基因的酿酒酵母工程菌发酵性能研究 | 第38-40页 |
| 3.1.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.2 过量表达ILV5基因对酿酒酵母异丁醇产量影响的研究 | 第41-47页 |
| 3.2.1 质粒YEplac112-PGK1p-ILV5-GFP-CYC1的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.2 过量表达ILV5基因的酿酒酵母工程菌的构建 | 第44页 |
| 3.2.3 同时过量表达ILV2、ILV5、ARO10等基因对工程菌株发酵性能的影响 | 第44-46页 |
| 3.2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 3.3 二倍体酿酒酵母细胞中过量表达ILVs、ARO10、ADH7、ZWF1基因对异丁醇产量影响的研究 | 第47-53页 |
| 3.3.1 质粒YCplac33-TDH3p-COX4-ADH7-GFP-CYC1的构建 | 第48-50页 |
| 3.3.2 二倍体酿酒酵母菌株的构建 | 第50页 |
| 3.3.3 过量表达ILVs、ARO10、ADH7、ZWF1基因的二倍体工程菌发酵性能 | 第50-53页 |
| 3.3.4 讨论 | 第53页 |
| 3.4 高耐受异丁醇酿酒酵母菌株的突变与筛选 | 第53-59页 |
| 3.4.1 选择平板异丁醇浓度的确定 | 第54-55页 |
| 3.4.2 EMS诱变最佳浓度的选择 | 第55页 |
| 3.4.3 诱变菌株的筛选 | 第55-59页 |
| 第四章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 4.1 结论 | 第59-60页 |
| 4.2 展望 | 第60页 |
| 4.3 创新点 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 附件1 | 第65-67页 |
| 附件2 文章中涉及基因 | 第67-69页 |
| 攻读学位期间所取得的相关科研成果 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
