| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 主要符号对照表 | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-22页 |
| 1.1 细胞自噬的研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1.1 细胞自噬简介 | 第9-10页 |
| 1.1.2 细胞自噬的基本过程与分子机制 | 第10-13页 |
| 1.1.3 细胞自噬的生理意义 | 第13-14页 |
| 1.1.4 细胞自噬与癌症 | 第14-15页 |
| 1.2 microRNA的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.2.1 microRNA简介 | 第15-19页 |
| 1.2.2 microRNA与细胞自噬 | 第19页 |
| 1.2.3 microRNA与癌症 | 第19-20页 |
| 1.2.4 miR-20a的研究现状 | 第20页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第22-26页 |
| 2.3.1 细胞培养相关试剂与材料 | 第22-23页 |
| 2.3.2 蛋白质免疫印迹相关试剂与材料 | 第23-24页 |
| 2.3.3 RT-PCR相关试剂与材料 | 第24-25页 |
| 2.3.4 构建慢病毒细胞系实验试剂与材料 | 第25-26页 |
| 2.3.5 荧光素酶报告实验相关试剂与材料 | 第26页 |
| 2.3.6 其它实验相关试剂与材料 | 第26页 |
| 2.2 实验仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.3.1 细胞转染 | 第27-28页 |
| 2.3.2 蛋白质免疫印迹 | 第28-29页 |
| 2.3.3 提取总RNA | 第29页 |
| 2.3.4 RNA的反转录 | 第29-30页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2.3.6 慢病毒细胞系的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.7 双荧光素酶检测实验 | 第32页 |
| 2.3.8 免疫荧光 | 第32页 |
| 2.3.9 激光共聚焦成像 | 第32-33页 |
| 2.3.10 检测ROS | 第33页 |
| 2.3.11 原位杂交与免疫组化 | 第33页 |
| 2.3.12 小鼠移植瘤实验 | 第33页 |
| 2.3.13 生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 2.3.14 统计分析 | 第34-35页 |
| 第3章 miR-20a抑制细胞自噬促进乳腺癌的发生 | 第35-59页 |
| 3.1 miR-20a在人类乳腺癌特别是三阴性乳腺癌中表达上调 | 第35-36页 |
| 3.2 GESA分析显示miR-20a与自噬/溶酶体通路负相关 | 第36-37页 |
| 3.3 miR-20a抑制自噬与溶酶体水解活性 | 第37-42页 |
| 3.3.1 miR-20a抑制细胞自噬体的形成 | 第38页 |
| 3.3.2 miR-20a降低细胞中LC3-II/LC3-I的比值 | 第38-39页 |
| 3.3.3 饥饿诱导miR-20a下调 | 第39-40页 |
| 3.3.4 miR-20a下调细胞自噬流活性 | 第40-41页 |
| 3.3.5 miR-20a抑制溶酶体活性 | 第41-42页 |
| 3.4 抑制内源性miR-20a导致自噬/溶酶体活性增高 | 第42-45页 |
| 3.5 miR-20a靶向多个自噬相关基因 | 第45-48页 |
| 3.5.1 miR-20a下调靶基因的mRNA与蛋白表达 | 第46-47页 |
| 3.5.2 miR-20a靶点的验证 | 第47-48页 |
| 3.6 miR-20a诱导代谢压力下DNA损伤并上调细胞活性氧水平 | 第48-51页 |
| 3.6.1 DNA损伤标志物与ROS的检测 | 第48-49页 |
| 3.6.2 敲低靶基因抑制自噬,促进DNA损伤 | 第49-51页 |
| 3.6.3 过表达靶基因促进自噬,抑制DNA损伤 | 第51页 |
| 3.7 乳腺癌组织中miR-20a与靶基因的表达显著负相关 | 第51-54页 |
| 3.7.1 乳腺癌组织中miR-20a高表达 | 第51-52页 |
| 3.7.2 乳腺癌组织中ATG16L1、BECN1与SQSTM1低表达 | 第52-53页 |
| 3.7.3 乳腺癌中三个靶基因与miR-20a负相关 | 第53-54页 |
| 3.8 乳腺癌中miR-20a影响基因组的稳定性 | 第54-55页 |
| 3.9 体内实验表明miR-20a促进肿瘤发生 | 第55-57页 |
| 3.9.1 慢病毒细胞系的构建与验证 | 第55页 |
| 3.9.2 小鼠移植瘤实验 | 第55-57页 |
| 3.10 实验结果分析 | 第57-59页 |
| 第4章 总结与展望 | 第59-63页 |
| 4.1 课题总结 | 第59-61页 |
| 4.2 课题展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第72页 |
