| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第9-20页 |
| 1 基因编辑技术——CRISPR/Cas9技术 | 第9-14页 |
| 1.1 CRISPR/Cas系统的发展及应用 | 第10-12页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9结构及作用机制 | 第12-14页 |
| 1.3 展望 | 第14页 |
| 2 Dppa5的研究进展 | 第14-18页 |
| 2.1 Dppa5a结构分析 | 第15-16页 |
| 2.2 Dppa5a与多能性细胞 | 第16-17页 |
| 2.3 Dppa5a与胚胎发育 | 第17-18页 |
| 2.4 Dppa5a与体细胞重编程 | 第18页 |
| 2.5 Dppa5a与疾病 | 第18页 |
| 3 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-36页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 实验动物 | 第20页 |
| 1.2 实验仪器 | 第20页 |
| 1.3 实验试剂及配制 | 第20-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-36页 |
| 2.1 相关引物设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.2 CRISPR/Cas9 SgRNA的体外转录 | 第23-24页 |
| 2.3 准备结扎雄鼠及假孕母鼠 | 第24-25页 |
| 2.4 雌鼠超排与卵母细胞、早期胚胎的获取 | 第25-26页 |
| 2.5 显微注射 | 第26-27页 |
| 2.6 胚胎移植 | 第27-28页 |
| 2.7 突变小鼠的鉴定 | 第28-30页 |
| 2.8 Dppa5a~(-/-)小鼠种群的建立 | 第30页 |
| 2.9 Dppa5a~(-/-)小鼠的留种—胚胎冻存 | 第30-32页 |
| 2.10 基因的mRNA转录水平分析 | 第32-34页 |
| 2.11 组织石蜡包埋、切片及HE染色 | 第34-35页 |
| 2.12 敲除小鼠生存、生长、生殖能力分析 | 第35-36页 |
| 第3章 结果与分析 | 第36-46页 |
| 1 Dppa5a mRNA在卵母细胞及早期胚胎中的表达 | 第36-37页 |
| 2 Dppa5a~(-/-)小鼠模型的建立 | 第37-40页 |
| 2.1 sgRNA的体外转录 | 第37-38页 |
| 2.2 Dppa5a基因敲除胚胎的发育及移植效率 | 第38页 |
| 2.3 F0代小鼠的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4 Dppa5a~(-/-)小鼠的繁育及留种 | 第39-40页 |
| 3 Dppa5a~(-/-)小鼠的表型分析 | 第40-46页 |
| 3.1 GV期卵母细胞构型分析 | 第40-42页 |
| 3.2 生存能力分析 | 第42-43页 |
| 3.3 生殖能力分析 | 第43-44页 |
| 3.4 组织学分析 | 第44-45页 |
| 3.5 小肠发育相关基因的表达分析 | 第45-46页 |
| 第4章 讨论与结论 | 第46-49页 |
| 1 讨论 | 第46-48页 |
| 2 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 附录 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 在校期间公开发表论文及著作情况 | 第64页 |
