| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 燕麦研究概况 | 第10-11页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9基因定点编辑技术 | 第11-13页 |
| 1.3 拿捕净对禾本科牧草的作用机理 | 第13-14页 |
| 1.4 乙酰辅酶A羧化酶(ACCase) | 第14-16页 |
| 1.5 燕麦育种的常用方法 | 第16-18页 |
| 1.5.1 分子育种 | 第16-18页 |
| 1.5.2 常规育种 | 第18页 |
| 1.5.3 诱变育种 | 第18页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 1.7 试验技术路线图 | 第19-20页 |
| 2 试验材料、试验试剂与仪器 | 第20-22页 |
| 2.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第20页 |
| 2.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.3 试验仪器 | 第21-22页 |
| 3 试验方法 | 第22-31页 |
| 3.1 燕麦乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因CT区的克隆 | 第22-25页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第22页 |
| 3.1.2 提取燕麦总RNA(Trizol法) | 第22-23页 |
| 3.1.3 cDNA反转录 | 第23页 |
| 3.1.4 乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因CT区的克隆 | 第23-24页 |
| 3.1.5 胶回收 | 第24页 |
| 3.1.6 载体连接及菌体转化 | 第24-25页 |
| 3.1.7 菌液PCR | 第25页 |
| 3.2 利用CRISPR/Cas9技术对ACCase基因CT区的编辑 | 第25-27页 |
| 3.2.1 载体构建 | 第25-27页 |
| 3.3 基因枪介导燕麦ACCase基因的 Cas9载体转入 | 第27-29页 |
| 3.3.1 材料 | 第27页 |
| 3.3.2 外植体接种和培养 | 第27-28页 |
| 3.3.3 轰击前后外植体的处理 | 第28页 |
| 3.3.4 轰击参数 | 第28-29页 |
| 3.4 燕麦转基因植株的阳性鉴定 | 第29-31页 |
| 3.4.1 CTAB法提取转基因植株的基因组DNA | 第29页 |
| 3.4.2 转基因植株的PCR检测 | 第29-31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-37页 |
| 4.1 燕麦总RNA检测 | 第31页 |
| 4.2 燕麦ACCase基因的克隆及序列分析 | 第31-33页 |
| 4.2.1 燕麦ACCase基因中间片段的获得 | 第31-32页 |
| 4.2.2 燕麦ACCase基因的分析 | 第32-33页 |
| 4.3 利用CRISPR/Cas9技术对ACCase基因的载体构建 | 第33-35页 |
| 4.3.1 序列查找与靶位点的选择 | 第33页 |
| 4.3.2 CRISPR/Cas9载体构建 | 第33-34页 |
| 4.3.3 修复模板的合成 | 第34-35页 |
| 4.4 燕麦转基因植株的阳性鉴定 | 第35-37页 |
| 5 讨论 | 第37-39页 |
| 5.1 燕麦乙酰辅酶A羧化酶基因(ACCase)CT区的克隆与分析 | 第37页 |
| 5.2 CRISPR/Cas9技术对乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因的编辑 | 第37-38页 |
| 5.3 基因枪法介导的燕麦成熟胚的转化 | 第38-39页 |
| 6 结论 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
