| 英文缩略词表 | 第7-9页 |
| 第一部分 MiR-637通过靶向调控CTSB抑制胆管癌QBC939细胞增殖与活力 | 第9-50页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 主要技术路线 | 第16页 |
| 实验设计 | 第16-38页 |
| 第一步 | 第17-31页 |
| 1 实验材料 | 第17-19页 |
| 1.1 人类胆管癌组织 | 第17页 |
| 1.2 胆管癌细胞 | 第17页 |
| 1.3 RT-PCR相关 | 第17-18页 |
| 1.4 慢病毒感染细胞相关 | 第18页 |
| 1.5 MTT检测相关 | 第18页 |
| 1.6 划痕实验相关 | 第18页 |
| 1.7 凋亡实验相关 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.1 总RNA的提取和逆转录-定量多聚链反应(RT-PCR) | 第19-22页 |
| 2.1.1 收取样品,Trizol裂解 | 第19页 |
| 2.1.2 反转录获得cDNA | 第19-21页 |
| 2.1.3 Real-timePCR检测 | 第21页 |
| 2.1.4 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2 慢病毒感染细胞的实验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 准备细胞 | 第22页 |
| 2.2.2 细胞慢病毒感染 | 第22页 |
| 2.2.3 MTT试验方法 | 第22-23页 |
| 2.2.4 划痕实验 | 第23页 |
| 2.2.5 凋亡实验 | 第23页 |
| 2.2.6 细胞周期实验 | 第23页 |
| 2.2.7 数据分析 | 第23-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-31页 |
| 3.1 人类胆管癌组织与癌旁组织的miR-637表达,人类胆管癌细胞与正常胆管上皮细胞miR-637表达 | 第24-25页 |
| 3.2 人类胆管癌细胞QBC939miR-637表达丰度的检验 | 第25页 |
| 3.3 慢病毒感染细胞实验结果 | 第25-27页 |
| 3.4 MTT实验结果 | 第27-28页 |
| 3.5 划痕实验结果 | 第28页 |
| 3.6 凋亡实验 | 第28-29页 |
| 3.7 细胞周期实验 | 第29-31页 |
| 3.8 实验结果分析 | 第31页 |
| 第二步 | 第31-38页 |
| 1 实验与方法 | 第31-34页 |
| 1.1 质粒转染细胞 | 第31-32页 |
| 1.2 双荧光素酶报告实验检测 | 第32页 |
| 1.3 Westernblot实验 | 第32-34页 |
| 1.4 生物信息学分析 | 第34页 |
| 1.5 数据分析 | 第34页 |
| 2 实验结果 | 第34-38页 |
| 2.1 通过生物学信息软件预测miR-637潜在靶基因 | 第34-35页 |
| 2.2 双荧光素酶报告实验验证CTSB是miR-637的靶基因 | 第35-37页 |
| 2.3 过表达miR-637抑制了CTSB的表达 | 第37页 |
| 2.4 CTSB在胆管癌组织中表达较癌旁组织升高 | 第37页 |
| 2.5 Real-TimePCR显示miR-637与CTSB表达负相关 | 第37-38页 |
| 实验结果分析 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 第二部分 shRNA干扰CTSB抑制胆管癌细胞QBC939的增殖及活力 | 第50-69页 |
| 1.摘要 | 第50页 |
| Abstract | 第50-51页 |
| 2.背景 | 第51-52页 |
| 3.材料与方法 | 第52-55页 |
| 4.结果 | 第55-61页 |
| 5.讨论 | 第61-64页 |
| 6.参考文献 | 第64-69页 |
| 综述 | 第69-94页 |
| 参考文献 | 第80-94页 |
| 攻读学位期间的主要成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
