| 内容提要 | 第1-7页 |
| 第1章 前言 | 第7-17页 |
| ·背景知识 | 第7-13页 |
| ·细胞凋亡 | 第7页 |
| ·细胞凋亡与恶性肿瘤 | 第7-8页 |
| ·CyclinA/CDK2 在细胞周期及细胞凋亡中的作用 | 第8-10页 |
| ·激酶底物的筛选方法及原理 | 第10-12页 |
| ·基因嵌入（Knock-in）的原理 | 第12-13页 |
| ·论文研究目的及设计思路 | 第13-17页 |
| ·论文研究目的 | 第13-14页 |
| ·论文设计思路 | 第14-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-26页 |
| ·材料与试剂 | 第17-18页 |
| ·质粒、菌株和细胞株 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·主要溶液 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-26页 |
| ·pCMV-CDK2-myc 载体的构建 | 第18-20页 |
| ·用全载体突变法获得pCMV-CDK2（F80A）-myc 载体 | 第20页 |
| ·细胞转染与筛选 | 第20-21页 |
| ·目的蛋白质的免疫印迹分析 | 第21-22页 |
| ·CDK2(F80A) knock-in 打靶载体的构建 | 第22-24页 |
| ·电击转化与knock-in 细胞系的筛选 | 第24-25页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第25-26页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第26-35页 |
| ·人突变型CDK2（F80A）稳定细胞系的建立 | 第26-28页 |
| ·pC54-CDK2 载体的构建 | 第26页 |
| ·pCMV-CDK2-myc 载体的构建 | 第26-27页 |
| ·pCMV-CDK2-myc 载体突变 | 第27页 |
| ·稳定表达细胞系的immunoblotting 鉴定 | 第27-28页 |
| ·CDK2(F80A)knock-in 细胞系的建立 | 第28-35页 |
| ·打靶载体的构建 | 第28-32页 |
| ·打靶载体的线性化与电转染 | 第32-33页 |
| ·阳性细胞株PCR 分析方案 | 第33-35页 |
| 结论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-41页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 中文摘要 | 第43-46页 |
| Abstract | 第46-48页 |
