| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 课题研究背景及研究目的和意义 | 第11-12页 |
| 1.2 乳酸菌胞外多糖的研究进展 | 第12-19页 |
| 1.2.1 乳酸菌胞外多糖的分类 | 第12-14页 |
| 1.2.2 乳酸菌胞外多糖的构效关系 | 第14-15页 |
| 1.2.3 乳酸菌胞外多糖的生物合成 | 第15-16页 |
| 1.2.4 影响乳酸菌胞外多糖产量因素 | 第16-17页 |
| 1.2.5 乳酸菌胞外多糖的生物活性 | 第17-19页 |
| 1.3 内质网应激 | 第19-21页 |
| 1.4 氧化应激 | 第21-22页 |
| 1.5 本课题主要研究内容 | 第22-24页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.5.2 本课题的技术路线 | 第23-24页 |
| 第2章 材料和方法 | 第24-40页 |
| 2.1 材料及仪器 | 第24-27页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 基本实验操作 | 第27-29页 |
| 2.2.1 实验菌株和细胞 | 第27页 |
| 2.2.2 乳酸菌计数 | 第27-28页 |
| 2.2.3 细胞计数 | 第28页 |
| 2.2.4 细胞复苏 | 第28页 |
| 2.2.5 细胞传代 | 第28页 |
| 2.2.6 细胞冻存 | 第28-29页 |
| 2.3 乳酸菌胞外多糖的提取和筛选 | 第29-30页 |
| 2.3.1 乳酸菌胞外多糖的提取及优化 | 第29页 |
| 2.3.2 乳酸菌胞外多糖总糖量的测定 | 第29-30页 |
| 2.3.3 乳酸菌胞外多糖的筛选 | 第30页 |
| 2.4 乳酸菌胞外多糖诱导HT-29 凋亡的研究 | 第30-32页 |
| 2.4.1 MTT实验检测乳酸菌胞外多糖对HT-29 的生长抑制作用 | 第30-31页 |
| 2.4.2 倒置显微镜观察细胞数目变化 | 第31页 |
| 2.4.3 Hoechst33258 染色观察细胞形态 | 第31页 |
| 2.4.4 透射电镜观察细胞形态 | 第31-32页 |
| 2.4.5 流式细胞仪检测细胞周期 | 第32页 |
| 2.5 乳酸菌胞外多糖诱导HT-29 凋亡中氧化应激机制的研究 | 第32-37页 |
| 2.5.1 细胞内ROS的变化 | 第32-33页 |
| 2.5.2 RT-PCR检测HT-29 细胞内抗氧化酶基因的表达 | 第33-36页 |
| 2.5.3 细胞内CAT，SOD和GSH-PX酶活的变化 | 第36-37页 |
| 2.5.4 抑制氧化应激途径，倒置显微镜观察细胞数目变化 | 第37页 |
| 2.6 乳酸菌胞外多糖诱导HT-29 凋亡中内质网应激机制的研究 | 第37-39页 |
| 2.6.1 HT-29 细胞中钙网蛋白的变化 | 第37页 |
| 2.6.2 RT-PCR检测HT-29 中GRP78、ATF4 和CHOP mRNA的表达 | 第37-38页 |
| 2.6.3 凋亡相关因子mRNA的表达 | 第38-39页 |
| 2.6.4 NAC处理后，HT-29 细胞内ROS水平变化 | 第39页 |
| 2.6.5 氧化应激抑制后HT-29 中GRP78 和CHOP mRNA的表达变化 | 第39页 |
| 2.7 数据统计与分析 | 第39-40页 |
| 第3章M5-EPS诱导HT-29 凋亡的研究 | 第40-52页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 胞外多糖的提取和筛选 | 第40-44页 |
| 3.2.1 菌落计数 | 第40-41页 |
| 3.2.2 胞外多糖的含糖量测定 | 第41-42页 |
| 3.2.3 乳酸菌胞外多糖发酵条件优化 | 第42页 |
| 3.2.4 三株乳酸菌胞外多糖的初步筛选 | 第42-44页 |
| 3.3 乳酸菌胞外多糖诱导HT-29 凋亡的研究 | 第44-50页 |
| 3.3.1 MTT法检测M5-EPS对HT-29 的抑制作用 | 第44-45页 |
| 3.3.2 倒置显微镜观察M5-EPS对HT-29 细胞数目的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.3 Hochest33258 荧光染色 | 第46-47页 |
| 3.3.4 透射电镜观察HT-29 形态变化 | 第47-48页 |
| 3.3.5 M5-EPS对HT-29 周期的影响 | 第48-50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第4章 氧化应激机制的研究 | 第52-62页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 M5-EPS对HT-29 细胞内ROS的影响 | 第52-54页 |
| 4.3 RT-PCR检测HT-29 细胞内抗氧化酶基因的表达 | 第54-58页 |
| 4.3.1 琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA纯度 | 第54页 |
| 4.3.2 M5-EPS诱导HT-29 中SOD，CAT和GSH-PX的mRNA表达 | 第54-57页 |
| 4.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第57-58页 |
| 4.4 SOD，CAT和GSH-PX酶活的变化 | 第58-60页 |
| 4.5 NAC处理后HT-29 细胞数目的变化 | 第60-61页 |
| 4.6 本章小结 | 第61-62页 |
| 第5章 内质网应激机制的研究 | 第62-71页 |
| 5.1 前言 | 第62页 |
| 5.2 M5-EPS诱导HT-29 中钙网蛋白的变化 | 第62-63页 |
| 5.3 M5-EPS诱导HT-29 发生内质网应激 | 第63-65页 |
| 5.4 M5-EPS对凋亡相关因子的影响 | 第65-68页 |
| 5.5 NAC处理后，HT-29 细胞内ROS的变化 | 第68页 |
| 5.6 NAC处理对内质网应激的影响 | 第68-69页 |
| 5.7 本章小结 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其他成果 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
