| 摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-11页 |
| ·细胞迁移与细胞伪足的关系 | 第8页 |
| ·侵入性伪足是细胞外基质降解的关键结构 | 第8-9页 |
| ·Cortactin 是肿瘤侵袭和肿瘤转移过程中的关键蛋白 | 第9页 |
| ·Myo X 在细胞迁移过程中起着重要的作用 | 第9-10页 |
| ·立题依据 | 第10-11页 |
| 2 材料和方法 | 第11-18页 |
| ·细胞株和菌种 | 第11页 |
| ·主要试剂和抗体 | 第11页 |
| ·构建Myo X-shRNA 表达载体 | 第11-13页 |
| ·序列设计 | 第11-12页 |
| ·退火 | 第12页 |
| ·构建pEN_hH1-Myo X 克隆 | 第12页 |
| ·LR 重组构建Myo X-shRNA | 第12-13页 |
| ·沉默效率检测 | 第13页 |
| ·慢病毒包装 | 第13页 |
| ·质粒的大量制备 | 第13-14页 |
| ·细胞总RNA 提取和RT-PCR 以及Realtime PCR | 第14-15页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第14页 |
| ·去除DNA 污染 | 第14页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第14-15页 |
| ·RT-PCR | 第15页 |
| ·Real-time PCR | 第15页 |
| ·Western Blot | 第15-17页 |
| ·细胞裂解液的制备 | 第15-16页 |
| ·免疫印迹 | 第16-17页 |
| ·侵入性伪足的定位 | 第17页 |
| ·Matrigel 侵袭分析 | 第17-18页 |
| 3 结果与分析 | 第18-24页 |
| ·Myo X 在乳腺癌细胞系中差量表达 | 第18-19页 |
| ·Myo X 与cortactin 共定位 | 第19页 |
| ·Myo X 在侵入性伪足中表达 | 第19-21页 |
| ·慢病毒包装Myo X-shRNA | 第21-23页 |
| ·沉默Myo X 后MDA-MB-231 细胞侵袭能力降低 | 第23-24页 |
| 4 讨论 | 第24-25页 |
| 5 结论 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-29页 |
| 致谢 | 第29页 |
