| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 第一部分 甘草miRNA的分离与鉴定 | 第14-21页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 材料 | 第14-15页 |
| 1.1 样本 | 第14页 |
| 1.2 试剂 | 第14页 |
| 1.3 仪器 | 第14-15页 |
| 2 方法 | 第15-18页 |
| 2.1 实验样本制备 | 第15页 |
| 2.2 甘草miRNA提取 | 第15-16页 |
| 2.3 DnaseⅠ处理甘草miRNA | 第16-17页 |
| 2.4 甘草miRNA电泳鉴定 | 第17页 |
| 2.4.1 配制 1%琼脂糖凝胶 | 第17页 |
| 2.4.2 上样及电泳 | 第17页 |
| 2.5 甘草miRNA浓度及纯度测定 | 第17-18页 |
| 3 结果 | 第18-19页 |
| 3.1 甘草粗提物制备 | 第18页 |
| 3.2 甘草miRNA的提取与鉴定 | 第18-19页 |
| 3.3 甘草miRNA的质量分析 | 第19页 |
| 4 讨论 | 第19-20页 |
| 5 小结 | 第20-21页 |
| 第二部分 甘草miRNA测序分析及新miRNA预测 | 第21-32页 |
| 引言 | 第21页 |
| 1 材料 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-24页 |
| 2.1 文库构建、测序及数据分析 | 第21-24页 |
| 2.1.1 甘草样品小RNA建库 | 第21-22页 |
| 2.1.2 甘草样品小RNA高通量测序后的生物信息学分析 | 第22-24页 |
| 3 结果 | 第24-29页 |
| 3.1 原始序列的处理与统计 | 第24-25页 |
| 3.2 Clean序列的比对分析 | 第25-28页 |
| 3.2.1 sRNA与其中的非编码RNA的比对 | 第26-27页 |
| 3.2.2 sRNA与已知miRNA的比对 | 第27页 |
| 3.2.3 miRNA碱基偏向性 | 第27页 |
| 3.2.4 小RNA分类注释 | 第27-28页 |
| 3.3 新miRNA预测 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 5 小结 | 第31-32页 |
| 第三部分 甘草miRNA对人的靶基因预测和注释 | 第32-36页 |
| 引言 | 第32页 |
| 1 靶基因的预测和GO注释 | 第32-33页 |
| 1.1 靶基因与预测 | 第32页 |
| 1.2 GO注释和富集 | 第32-33页 |
| 2 数据结果分析 | 第33-34页 |
| 2.1 靶基因预测结果分析 | 第33页 |
| 2.2 GO注释和富集结果分析 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 4 小结 | 第35-36页 |
| 第四部分 甘草miRNA对人免疫细胞的影响 | 第36-53页 |
| 引言 | 第36页 |
| 1 材料 | 第36-38页 |
| 1.1 试剂 | 第36页 |
| 1.2 仪器 | 第36-37页 |
| 1.3 引物 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| 2.1 细胞水平 | 第38页 |
| 2.1.1 人外周血单个核细胞（PBMC）分离 | 第38页 |
| 2.1.2 PBMC的体外培养与处理 | 第38页 |
| 2.1.3 细胞形态观察与计数 | 第38页 |
| 2.1.4 细胞表型的流式细胞术检测 | 第38页 |
| 2.2 分子水平 | 第38-41页 |
| 2.2.1 细胞总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.2 反转录聚合酶链式反应 | 第39-40页 |
| 2.2.3 RT-PCR法检测细胞因子表达 | 第40-41页 |
| 2.2.4 RT-PCR法检测细胞因子表达 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-49页 |
| 3.1 甘草miRNA对免疫细胞形态学的影响 | 第41-42页 |
| 3.2 不同处理组PBMC的增殖情况 | 第42-43页 |
| 3.3 甘草miRNA作用免疫细胞后的表型变化 | 第43-44页 |
| 3.4 甘草miRNA对免疫细胞表达转录因子和细胞因子的影响 | 第44-49页 |
| 3.4.1 甘草miRNA对免疫细胞表达转录因子的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.2 甘草miRNA对免疫细胞表达细胞因子的影响 | 第46-48页 |
| 3.4.3 甘草 miRNA 对免疫细胞表达 TLR 的影响 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 总结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 附录 A 实验相关基因引物序列 | 第58-61页 |
| 附录 B 攻读学位期间发表的论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
