| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号与缩略语说明 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 烟碱类杀虫剂 | 第14-18页 |
| 1.1.1 烟碱类杀虫剂的发展 | 第14-16页 |
| 1.1.2 烟碱类杀虫剂中间体的研究 | 第16-18页 |
| 1.2 烟酸和6-羟基烟酸的简介 | 第18-20页 |
| 1.2.1 烟酸和6-羟基烟酸的基本性质 | 第18-19页 |
| 1.2.2 烟酸和6-羟基烟酸的用途 | 第19-20页 |
| 1.3 烟酸的微生物降解的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 降解烟酸的微生物种类 | 第20-21页 |
| 1.3.2 烟酸的微生物代谢途径及酶学研究 | 第21-23页 |
| 1.4 本论文研究目的、意义和主要内容 | 第23-26页 |
| 1.4.1 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.4.2 研究的主要内容 | 第24-26页 |
| 第二章 烟酸降解菌的生长及降解特性研究 | 第26-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株、试剂及仪器 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 缓冲液 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.2.1 菌株T2对烟酸降解能力的初步验证 | 第27页 |
| 2.2.2 菌株T2种子液的制备 | 第27页 |
| 2.2.3 菌株T2的生物量及烟酸残留量和中间代谢产物的检测方法 | 第27-28页 |
| 2.2.4 外界条件对菌株T2降解特性的影响 | 第28-29页 |
| 2.2.5 菌株T2生长与烟酸降解关系的探究 | 第29页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 菌株T2对烟酸的降解能力 | 第29页 |
| 2.3.2 pH值对菌株T2降解烟酸的影响 | 第29-30页 |
| 2.3.3 温度对菌株T2降解烟酸的影响 | 第30页 |
| 2.3.4 接种量对菌株T2降解烟酸的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.5 烟酸初始浓度对菌株T2降解烟酸的影响 | 第31-32页 |
| 2.3.6 菌株T2对烟酸的利用 | 第32页 |
| 2.3.7 菌株T2降解代谢产物的鉴定 | 第32-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-36页 |
| 第三章 Pusillimonas sp. T2基因组测序、功能注释分析及基因比较 | 第36-52页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第37-41页 |
| 3.1.1 菌株,试剂与培养基 | 第37页 |
| 3.1.2 基因组DNA提取 | 第37页 |
| 3.1.3 全基因组序列上机文库的构建 | 第37-41页 |
| 3.1.4 生物学信息分析 | 第41页 |
| 3.1.5 烟酸降解关键基因的查找和生物信息学分析 | 第41页 |
| 3.2 结果与分析 | 第41-51页 |
| 3.2.1 菌株T2基因组DNA提取 | 第41-42页 |
| 3.2.2 测序数据统计 | 第42页 |
| 3.2.3 基因组序列的组装 | 第42-43页 |
| 3.2.4 预测基因结果 | 第43-44页 |
| 3.2.5 rRNA/tRNA预测结果 | 第44-45页 |
| 3.2.6 基因功能注释结果 | 第45-48页 |
| 3.2.7 烟酸代谢相关基因分析 | 第48-51页 |
| 3.3 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 烟酸降解关键基因nahAB_1B_2的克隆与功能鉴定 | 第52-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-55页 |
| 4.1.1 菌株及实验仪器 | 第52-53页 |
| 4.1.2 培养基及培养条件 | 第53页 |
| 4.1.3 主要试剂及缓冲液 | 第53-54页 |
| 4.1.4 引物设计 | 第54-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-62页 |
| 4.2.1 菌株T2基因组DNA提取 | 第55页 |
| 4.2.2 菌株T2基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第55页 |
| 4.2.3 质粒DNA的小量提取 | 第55-56页 |
| 4.2.4 Over-lap PCR构建同源重组片段 | 第56-59页 |
| 4.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第59页 |
| 4.2.6 表达载体的构建 | 第59-62页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第62-66页 |
| 4.3.1 菌株T2基因组DNA提取 | 第62页 |
| 4.3.2 nahA、nahAB_1和nahB_2的特异性扩增 | 第62-63页 |
| 4.3.3 载体pBBR-MCS2酶切 | 第63-64页 |
| 4.3.4 重组菌株的烟酸降解功能验证 | 第64-66页 |
| 4.4 本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 酶学特性研究 | 第68-78页 |
| 5.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 5.1.1 菌株、质粒及实验仪器 | 第68-69页 |
| 5.1.2 培养基及培养条件 | 第69页 |
| 5.1.3 主要试剂及缓冲液 | 第69页 |
| 5.2 实验方法 | 第69-71页 |
| 5.2.1 表达菌株的诱导与表达 | 第69-70页 |
| 5.2.2 蛋白的功能鉴定 | 第70-71页 |
| 5.3 菌株HZN7-pBBR-nahAB_1B_2粗酶液特性研究 | 第71-72页 |
| 5.3.1 粗酶液中蛋白含量测定 | 第71页 |
| 5.3.2 NahAB_1B_2的动力学参数 | 第71-72页 |
| 5.3.3 金属离子对酶活力的影响 | 第72页 |
| 5.3.4 O_2消耗检测 | 第72页 |
| 5.3.5 NahAB_1B_2底物特异性检测 | 第72页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第72-77页 |
| 5.4.1 NahAB_1B_2的活性 | 第72-73页 |
| 5.4.2 酶含量和酶动力学参数 | 第73-74页 |
| 5.4.3 金属离子对NahAB_1B_2酶活的影响 | 第74-75页 |
| 5.4.4 NahAB_1B_2催化反应中O_2的来源 | 第75-76页 |
| 5.4.5 NahAB_1B_2的底物特异性 | 第76-77页 |
| 5.5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第六章 总结与展望 | 第78-82页 |
| 6.1 研究内容及结论 | 第78-79页 |
| 6.2 创新点 | 第79页 |
| 6.3 不足与展望 | 第79-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 附录1: 仪器设备 | 第90-92页 |
| 附录2: 文中所用培养基及试剂配方 | 第92-94页 |
| 附录3: 缓冲液 | 第94-95页 |
| 附录4: 相关DNA序列 | 第95-100页 |
| 作者简介 | 第100-101页 |
| 1 作者简历 | 第100页 |
| 2 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第100页 |
| 3 参与的科研项目 | 第100-101页 |
| 学位论文数据集 | 第101页 |
