| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 实验设计方案 | 第12-13页 |
| 1.1 实验目的和意义 | 第12页 |
| 1.2 研究内容 | 第12页 |
| 1.3 技术路线图 | 第12-13页 |
| 1.4 实验方案 | 第13页 |
| 2 实验材料和方法 | 第13-35页 |
| 2.1 材料 | 第13-23页 |
| 2.1.1 主要实验器材 | 第13-15页 |
| 2.1.2 主要试剂耗材 | 第15-18页 |
| 2.1.3 实验细胞株、大肠杆菌及载体 | 第18页 |
| 2.1.4 主要试剂及配制 | 第18-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 细胞培养及传代 | 第23页 |
| 2.2.2 细胞计数 | 第23页 |
| 2.2.3 细胞冻存 | 第23-24页 |
| 2.2.4 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.2.5 RNAs 的合成 | 第24页 |
| 2.2.6 RNAs 的转染 | 第24页 |
| 2.2.7 总 RNA 的提取 | 第24页 |
| 2.2.8 RNA 纯度的分析 | 第24页 |
| 2.2.9 逆转录反应 | 第24-26页 |
| 2.2.10 普通 PCR 和实时定量 PCR | 第26-27页 |
| 2.2.11 Western blot 检测相关蛋白表达情况 | 第27-29页 |
| 2.2.12 划痕实验检测细胞迁移能力 | 第29-30页 |
| 2.2.13 Transwell invasion 实验分析细胞侵袭能力 | 第30页 |
| 2.2.14 质粒的构建 | 第30-34页 |
| 2.2.15 双荧光素酶报告基因检测系统的操作 | 第34-35页 |
| 2.2.16 统计方法 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-46页 |
| 3.1 高转移 NSCLC 细胞 NCIH1299 在形态上具有间充质细胞特征 | 第35页 |
| 3.2 在高转移型 NSCLC 细胞中 miR33a 呈现低表达 | 第35-37页 |
| 3.3 miR33a 过表达抑制 EMT 及转移，反之亦然 | 第37-40页 |
| 3.4 miR33a 负调控 Twist1 | 第40-42页 |
| 3.5 成功构建 Twist13’UTR 野生型和突变性载体 | 第42-43页 |
| 3.6 Twist1 是 miR33a 的直接靶点 | 第43-44页 |
| 3.7 下调 Twist1 的表达抑制 EMT 和转移 | 第44-46页 |
| 4 结论 | 第46-47页 |
| 5 讨论 | 第47-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 附录A 缩写表及表1 | 第57-60页 |
| 附录B 综述 | 第60-76页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 在学研究成果 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
