| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文縮略表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-28页 |
| 1 引言 | 第11-28页 |
| 1.1 Kiss1/GPR54基因的定义 | 第12-13页 |
| 1.2 Kiss1/GPR54系统的分布 | 第13页 |
| 1.3 Kiss1/GPR54系统与繁殖系统的关系 | 第13-18页 |
| 1.3.1 Kiss1/GPR54系统与生殖系统发育 | 第13-15页 |
| 1.3.2 Kisspeptin/GPR54在下丘脑的表达 | 第15-17页 |
| 1.3.3 Kiss1和Kisspeptin在其他部位的表达 | 第17-18页 |
| 1.4 FSHR的研究概况 | 第18-19页 |
| 1.4.1 FSHR的定义与结构 | 第18页 |
| 1.4.2 FSHR的生理功能 | 第18-19页 |
| 1.5 pCaMKⅡ启动子的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.6 转基因动物研究进展 | 第20-26页 |
| 1.6.1 转基因动物研究概况 | 第20-21页 |
| 1.6.2 转基因动物制备方法 | 第21-25页 |
| 1.6.2.1 原核显微注射技术 | 第21-23页 |
| 1.6.2.2 慢病毒载体法 | 第23-24页 |
| 1.6.2.3 体细胞核移植法 | 第24页 |
| 1.6.2.4 RNAi介导的基因沉默 | 第24-25页 |
| 1.6.3 转基因动物研究展望 | 第25-26页 |
| 1.7 课题来源与研究背景 | 第26-28页 |
| 第二章 猪Kiss1基因克隆及真核表达载体pCaMKⅡ-Kiss1和AMH-pFSHR的构建 | 第28-42页 |
| 1 材料与方法 | 第28-35页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第28-29页 |
| 1.1.1 菌种与质粒来源 | 第28页 |
| 1.1.2 引物、工具酶及其他试剂 | 第28-29页 |
| 1.1.3 其他相关试剂配制 | 第29页 |
| 1.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 1.2.1 猪Kiss1基因的克隆及鉴定 | 第29-32页 |
| 1.2.1.1 猪下丘脑总RNA提取 | 第29-30页 |
| 1.2.1.2 猪Kiss1基因的扩增 | 第30-31页 |
| 1.2.1.3 质粒DNA的转化 | 第31页 |
| 1.2.1.4 菌液PCR扩增目的基因 | 第31页 |
| 1.2.1.5 质粒DNA提取 | 第31-32页 |
| 1.2.1.6 酶切鉴定 | 第32页 |
| 1.2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核载体构建 | 第32-34页 |
| 1.2.2.1 pCaMKⅡ载体的鉴定 | 第32页 |
| 1.2.2.2 pCaMKⅡ载体和pMD19-T-Kiss1载体酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 1.2.2.3 重组载体pCaMKⅡ-Kiss1的构建 | 第33页 |
| 1.2.2.4 质粒DNA提取 | 第33-34页 |
| 1.2.3 AMH-pFSHR真核表达载体的双酶切鉴定 | 第34页 |
| 1.2.4 重组质粒的线性化 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.1 猪Kiss1基因的克隆 | 第35-37页 |
| 2.2 pCaMK Ⅱ-Kiss1真核载体构建 | 第37-38页 |
| 2.3 AMH-pFSHR真核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 原核显微注射法制备转基因小鼠及其鉴定 | 第42-60页 |
| 1 转基因小鼠的制备的材料与方法 | 第42-44页 |
| 1.1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第42页 |
| 1.1.2 雌鼠发情周期的判断 | 第42页 |
| 1.1.3 小鼠的超排 | 第42页 |
| 1.1.4 受精卵获取 | 第42-43页 |
| 1.1.5 受精卵的移植 | 第43页 |
| 1.2 转基因小鼠制备 | 第43-44页 |
| 1.2.1 转基因小鼠制备流程图 | 第43-44页 |
| 2 转基因小鼠的鉴定 | 第44-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第44-50页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第44-46页 |
| 2.1.1.1 引物和探针 | 第44-45页 |
| 2.1.1.2 相关试剂的配制 | 第45-46页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第46-50页 |
| 2.1.2.1 鼠尾组织DNA提取 | 第46-47页 |
| 2.1.2.2 Southern blot检测 | 第47-49页 |
| 2.1.2.3 Gonome Walking | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-57页 |
| 3.1 转基因小鼠的PCR检测与Southern blot验证 | 第50-51页 |
| 3.2 转基因小鼠Genome Walking验证 | 第51-56页 |
| 3.3 转基因小鼠子代产仔数统计 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 附录1 显微注射猪Kiss1基因的DNA序列(8456bp) | 第73-75页 |
| 附录2 显微注射猪FSHR基因的DNA序列(5844bp) | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第79-80页 |
