| 缩略语表 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 第一部分 ATP合酶α亚单位抑制Aβ介导的细胞毒性作用 | 第15-42页 |
| 材料与方法 | 第15-27页 |
| 1. 材料 | 第15-18页 |
| ·菌种与质粒 | 第15页 |
| ·主要药品及试剂 | 第15-16页 |
| ·引物合成与DNA序列测定 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·有关溶液的配制 | 第16-18页 |
| 2. 方法 | 第18-27页 |
| ·质粒构建 | 第18-21页 |
| ·感受态大肠杆菌的转化 | 第21页 |
| ·挑斑、测序 | 第21页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第21-22页 |
| ·脂质体转染 | 第22页 |
| ·流式细胞仪分选 | 第22页 |
| ·SH-SY5Y细胞的培养 | 第22-23页 |
| ·细胞活力检测 | 第23页 |
| ·Aβ孵育人神经母细胞瘤细胞 | 第23页 |
| ·细胞免疫组化 | 第23-24页 |
| ·线粒体膜电位的测定 | 第24页 |
| ·Hoechst染色 | 第24-25页 |
| ·考马斯亮蓝法蛋白定量 | 第25页 |
| ·Western Blot免疫印迹 | 第25页 |
| ·统计分析 | 第25-27页 |
| 实验结果 | 第27-41页 |
| ·Aβ对人神经母细胞瘤细胞的毒性作用 | 第27页 |
| ·纤维状Aβ引起的Paxillin和Fak的应激性反应 | 第27-28页 |
| ·纤维状Aβ引起的c-FOS和ATP合酶α亚单位持续性增加 | 第28-29页 |
| ·ATP syn构建和鉴定 | 第29-30页 |
| ·转染细胞的形态学鉴定 | 第30-32页 |
| ·ATP合酶α亚单位与APP共定位 | 第32-33页 |
| ·ATP合酶α亚单位和线粒体外膜特异性蛋白TOM共定位 | 第33-34页 |
| ·ATP合酶α亚单位和线粒体内膜特异性蛋白TIM共定位 | 第34-35页 |
| ·ATP合酶α亚单位过表达对Aβ诱导的细胞损伤的抑制:MTT法 | 第35-36页 |
| ·ATP合酶α亚单位过表达抑制Aβ诱导的细胞损伤:WST法 | 第36-37页 |
| ·ATP合酶α亚单位过表达抑制Aβ诱导的线粒体膜电位的降低 | 第37-38页 |
| ·ATP合酶α亚单位过表达调节Aβ诱导的凋亡相关蛋白的表达 | 第38-41页 |
| 小结 | 第41-42页 |
| 第二部分 Aβ与ATP合酶α亚单位的体外相互作用 | 第42-76页 |
| 材料与方法 | 第42-52页 |
| 1. 材料 | 第42-44页 |
| ·菌种与质粒 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·引物合成与DNA序列测定 | 第42页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第42-44页 |
| 2. 方法 | 第44-52页 |
| ·成熟型ATP合酶α亚单位基因的引物设计 | 第44-45页 |
| ·基因PCR扩增 | 第45页 |
| ·感受态大肠杆菌BL21(DE3)的制备 | 第45页 |
| ·DNA片段酶切和回收 | 第45-46页 |
| ·成熟型ATP合酶α亚单位基因和质粒pGEX-4T2的连接、转化感受态大肠杆菌DH5α和酶切鉴定 | 第46页 |
| ·重组成熟型ATP合酶α亚单位在大肠杆菌中诱导表达 | 第46页 |
| ·可溶性表达分析 | 第46-47页 |
| ·细菌裂解 | 第47页 |
| ·重组蛋白GST-ATPase的GST亲和纯化 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白GST-ATPase的酶切和纯化 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE、Western Blotting和蛋白定量 | 第48-49页 |
| ·硫磺素T(ThT)试验 | 第49-50页 |
| ·蛋白质浊度检测 | 第50页 |
| ·ATP合酶α亚单位抗体与硫磺素S荧光染色 | 第50-51页 |
| ·ATP合酶β亚单位抗体与硫磺素S荧光染色 | 第51页 |
| ·ATP合酶α与β亚单位抗体免疫荧光染色 | 第51页 |
| ·统计分析 | 第51-52页 |
| 实验结果 | 第52-74页 |
| ·载体pGEX-4T2-ATPase的构建 | 第52页 |
| ·pGEX-4T2-ATPase的构建 | 第52-56页 |
| ·GST-ATPase的纯化、酶切和再纯化 | 第56-57页 |
| ·Aβ的激发和发射光谱检测 | 第57-60页 |
| ·荧光强度与fAβ_(25-35)和fAp_(1-40)浓度的依赖性 | 第60页 |
| ·ATP合酶α亚单位和ATP对Aβ聚集的抑制:ThT法 | 第60-63页 |
| ·ATP合酶α亚单位和ATP不能解聚纤维状Aβ25-35和Aβ_(1-40):ThT法 | 第63-64页 |
| ·ATP合酶α亚单位和ATP对Aβ聚集的抑制:浊度法 | 第64-68页 |
| ·ATP合酶α亚单位和ATP不能解聚纤维状Aβ25-35和Aβ_(1-40):浊度法 | 第68-69页 |
| ·AD转基因动物脑内ATP合酶α与β亚单位与老年斑关系的分析 | 第69-70页 |
| ·在AD转基因脑片上老年斑与ATP合酶α亚单位共存 | 第70页 |
| ·在AD转基因脑片上Aβ与ATP合酶α亚单位共存 | 第70-71页 |
| ·在AD转基因脑片上Aβ与ATP合酶β亚单位不存在共存 | 第71-74页 |
| 小结 | 第74-76页 |
| 讨论 | 第76-80页 |
| 总结与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 综述 | 第87-100页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 附录 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
