| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 荞麦简介 | 第10-13页 |
| 1.1.1 荞麦的营养特性 | 第10-12页 |
| 1.1.2 苦荞麦的药用功能 | 第12页 |
| 1.1.3 苦荞麦的食用 | 第12页 |
| 1.1.4 苦荞的其他用途 | 第12-13页 |
| 1.2 食物过敏 | 第13-16页 |
| 1.2.1 食物过敏类型与机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 食物过敏的治疗 | 第14页 |
| 1.2.3 食物脱敏的研究 | 第14-16页 |
| 1.2.3.1 酶法 | 第14-15页 |
| 1.2.3.2 生物学方法 | 第15页 |
| 1.2.3.3 物理化学法 | 第15-16页 |
| 1.3 荞麦过敏研究现状 | 第16-17页 |
| 1.4 亲和柱的制备 | 第17-18页 |
| 1.5 选题目的及研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 TBW16 过敏蛋白原核表达载体的构建 | 第20-26页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要的酶与试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.2 质粒抽提 | 第21-22页 |
| 2.2.3 目标片段 PCR 扩增 | 第22页 |
| 2.2.4 载体与 PCR 产物双酶切 | 第22页 |
| 2.2.5 切胶回收酶切产物 | 第22-23页 |
| 2.2.6 载体与目标片段连接 | 第23页 |
| 2.2.7 连接产物转化 | 第23页 |
| 2.2.8 连接产物的筛选与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24页 |
| 2.3.1 目标片段 PCR 扩增 | 第24页 |
| 2.3.2 测序鉴定 | 第24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 TBW16 过敏蛋白的诱导表达及纯化 | 第26-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第26页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 3.1.4 主要溶液 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-29页 |
| 3.2.1 重组质粒的转化 | 第27页 |
| 3.2.2 重组蛋白的表达 | 第27页 |
| 3.2.3 重组蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第27-29页 |
| 3.2.4 包涵体纯化 | 第29页 |
| 3.2.5 包涵体复性 | 第29页 |
| 3.2.6 目的蛋白的 Co2+离子层析纯化 | 第29页 |
| 3.3 实验结果 | 第29-31页 |
| 3.3.1 重组蛋白的表达 | 第29-30页 |
| 3.3.2 包涵体复性及目的蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 3.4 讨论 | 第31-33页 |
| 第四章 Sepharose 载体 TBW16 过敏蛋白亲和柱的制备 | 第33-36页 |
| 4.1 实验材料 | 第33页 |
| 4.1.1 亲和柱载体 | 第33页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 4.1.4 主要溶液 | 第33页 |
| 4.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 4.2.1 考马斯亮蓝 G-250 法测定 TBW16 过敏蛋白的浓度 | 第33-34页 |
| 4.2.2 载体 Sepharose CL 6B 的活化 | 第34页 |
| 4.2.3 TBW16 过敏蛋白与 Sepharose CL 6B 的共价结合 | 第34页 |
| 4.2.4 TBW16 过敏蛋白结合效率的检测 | 第34-35页 |
| 4.3 实验结果 | 第35页 |
| 4.3.1 考马斯亮蓝 G-250 法测定 TBW16 过敏蛋白的浓度 | 第35页 |
| 4.3.2 TBW16 过敏蛋白结合效率的检测 | 第35页 |
| 4.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第五章 TBW16 过敏蛋白靶向结合蛋白纯化 | 第36-43页 |
| 5.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 5.1.1 主要材料与试剂 | 第36页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第36页 |
| 5.1.3 主要溶液 | 第36-37页 |
| 5.2 试验方法 | 第37-39页 |
| 5.2.1 苦荞种子萌发过程中的 TBW16 过敏原蛋白的 Western blotting 分析 | 第37-38页 |
| 5.2.2 苦荞种子总蛋白的提取 | 第38页 |
| 5.2.3 TBW16 蛋白靶向结合未知蛋白 | 第38页 |
| 5.2.4 质谱鉴定靶向结合蛋白 | 第38-39页 |
| 5.3 实验结果 | 第39-42页 |
| 5.3.1 苦荞种子萌发过程中的 TBW16 过敏原蛋白的 Western blotting 分析 | 第39-40页 |
| 5.3.2 苦荞种子总蛋白 | 第40页 |
| 5.3.3 TBW16 蛋白靶向结合未知蛋白 | 第40-41页 |
| 5.3.4 质谱结果 | 第41-42页 |
| 5.4 讨论 | 第42-43页 |
| 第六章 总结与展望 | 第43-45页 |
| 6.1 总结 | 第43页 |
| 6.2 展望 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-51页 |
| 缩略词 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
