| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 本文缩写 | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 生物固氮 | 第13页 |
| 1.2 百脉根植物 | 第13-14页 |
| 1.3 根瘤共生关系 | 第14-17页 |
| 1.4 钙调素的研究 | 第17-19页 |
| 1.4.1 钙调素结构 | 第18页 |
| 1.4.2 钙调素的研究概况 | 第18-19页 |
| 1.5 序列比对及系统发育树构建 | 第19-21页 |
| 1.6 原核表达 | 第21-22页 |
| 2 研究意义、研究目标及技术路线 | 第22-24页 |
| 2.1 研究意义 | 第22页 |
| 2.2 研究目标 | 第22-23页 |
| 2.3 技术路线 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-35页 |
| 3.1 试验材料、试剂与仪器 | 第24-26页 |
| 3.1.1 植物材料及生长条件 | 第24页 |
| 3.1.2 试剂 | 第24页 |
| 3.1.3 主要培养基及溶液配方 | 第24-26页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 3.2.1 生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 3.2.2 百脉根RNA提取与反转录 | 第27页 |
| 3.2.3 LjCaM4基因的3'-RACE克隆 | 第27-29页 |
| 3.2.4 各组织LjCaM4基因定量分析 | 第29页 |
| 3.2.5 LjCaM4原核表达载体构建 | 第29-31页 |
| 3.2.6 LjCaM4表达条件筛选 | 第31-33页 |
| 3.2.7 LjCaM4的纯化及活性检测 | 第33-35页 |
| 4 结果 | 第35-47页 |
| 4.1 百脉根钙调素基因的鉴定 | 第35-38页 |
| 4.2 LjCaM4基因的克隆及序列分析 | 第38-41页 |
| 4.3 荧光定量PCR分析 | 第41页 |
| 4.4 LjCaM4原核表达 | 第41-45页 |
| 4.4.1 pET28-a(+)-LjCaM4转化子的鉴定 | 第42-43页 |
| 4.4.2 LjCaM4表达条件的筛选 | 第43-44页 |
| 4.4.3 LjCaM4的纯化及浓度测定 | 第44-45页 |
| 4.5 LjCaM4结合Ca~(2+)能力分析 | 第45-47页 |
| 5 讨论 | 第47-49页 |
| 5.1 LjCaMs基因的生物信息学与表达分析 | 第47-48页 |
| 5.2 LjCaM4的表达与纯化 | 第48-49页 |
| 5.3 LjCaM4结合Ca~(2+)后迁移率分析 | 第49页 |
| 6 结论与展望 | 第49-51页 |
| 6.1 结论 | 第49-50页 |
| 6.2 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录 | 第58-67页 |
| 附录一、pMD19-T Vector图谱 | 第58-59页 |
| 附录二、pET-28a(+)Vector图谱 | 第59-60页 |
| 附录三、purelink-RNA-mini-kit试剂盒提取L.japonicus根部RNA操作步骤 | 第60-61页 |
| 附录四、L.japonicus花与豆荚的RNA提取步骤 | 第61-62页 |
| 附录五、总RNA反转录成cDNA操作步骤 | 第62-63页 |
| 附录六、胶回收操作步骤 | 第63-64页 |
| 附录七、TOP10感受态细胞的制备 | 第64-65页 |
| 附录八、质粒提取操作步骤 | 第65-66页 |
| 附录九、BCA法测定蛋白浓度操作步骤 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第68页 |
