| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 本文缩写符号 | 第13-17页 |
| 一、引言 | 第17-29页 |
| 1.1 植物逆境胁迫信号转导 | 第17-18页 |
| 1.2 盐胁迫信号转导研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 盐与SOS途径 | 第18-19页 |
| 1.2.2 盐与ABA | 第19页 |
| 1.2.3 盐与MAPK级联途径 | 第19-20页 |
| 1.3 植物WRKY转录因子的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 植物WRKY转录因子的分类和结构 | 第21-22页 |
| 1.5 WRKY蛋白的结合基序W-box | 第22页 |
| 1.6 植物WRKY转录因子的生物学功能 | 第22-27页 |
| 1.6.1 生物胁迫 | 第22-24页 |
| 1.6.2 非生物胁迫 | 第24-25页 |
| 1.6.3 WRKY在植物发育及代谢中的作用 | 第25-26页 |
| 1.6.4 WRKY在植物衰老过程中的作用 | 第26页 |
| 1.6.5 WRKY转录因子的其它功能及多重生理过程调控 | 第26-27页 |
| 1.7 立题依据及意义 | 第27-29页 |
| 二、材料与方法 | 第29-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.2 载体和菌种 | 第29页 |
| 2.1.3 化学试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 工具酶 | 第29页 |
| 2.1.5 常用储液 | 第29-30页 |
| 2.1.6 常用缓冲液及提取buffer | 第30-31页 |
| 2.1.7 培养基 | 第31-32页 |
| 2.1.8 PCR反应试剂及DNA合成、测序 | 第32页 |
| 2.1.9 仪器设备 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-46页 |
| 2.2.1 GhWRKYcDNAs克隆与分离 | 第32-33页 |
| 2.2.2 棉花GhWRKY蛋白序列和进化同源性分析 | 第33页 |
| 2.2.3 棉花GhWRKY基因组织表达分析 | 第33-35页 |
| 2.2.4 GhWRKY12/16/31/32/33/34过量表达载体构建 | 第35-37页 |
| 2.2.5 PGBKT7-GhWRKY12/16/31/32/33/34载体构建及蛋白转录自激活分析 | 第37-39页 |
| 2.2.6 GhWRKYs::eGFP融合表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.7 拟南芥的遗传转化 | 第40-41页 |
| 2.2.8 拟南芥gDNA提取 | 第41页 |
| 2.2.9 拟南芥RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.2.10 琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的回收 | 第42页 |
| 2.2.11 大肠杆菌DH5α感受态的制备和转化 | 第42-43页 |
| 2.2.12 碱裂解法提取质粒 | 第43页 |
| 2.2.13 GhWRKY12/16 RNAi载体构建 | 第43页 |
| 2.2.14 棉花转化及继代培养 | 第43-44页 |
| 2.2.15 NaCl、Man和ABA对棉花幼苗的处理 | 第44页 |
| 2.2.16 过表达GhWRKY12/31/34转基因拟南芥盐胁迫实验 | 第44-46页 |
| 三、实验结果 | 第46-77页 |
| 3.1 棉花GhWRKY31/32/33/34基因的表达谱分析 | 第46页 |
| 3.2 棉花GhWRKY基因的电子克隆与表达分析 | 第46-48页 |
| 3.3 棉花GhWRKY蛋白的分类 | 第48-49页 |
| 3.4 棉花GhWRKY基因在棉花组织中的表达分析 | 第49-50页 |
| 3.5 棉花GhWRKY蛋白自身及与AtWRKYs的进化树分析 | 第50-52页 |
| 3.6 棉花GhWRKY过量表达载体构建 | 第52-54页 |
| 3.7 过量表达GhWRKY转基因拟南芥基因组DNA(gDNA)水平检测 | 第54-55页 |
| 3.8 GhWRKY蛋白亚细胞定位分析 | 第55-57页 |
| 3.9 棉花GhWRKY12/16/31/32/33/34/转录自激活分析 | 第57-60页 |
| 3.9.1 pGBKT7-GhWRKY12/16/31/32/33/34载体的构建及酵母阳性克隆的鉴定 | 第57-59页 |
| 3.9.2 GhWRKY12/16/31/32/33/34自激活活性鉴定 | 第59-60页 |
| 3.10 GhWRKY基因胁迫诱导表达模式分析 | 第60-64页 |
| 3.11 过量表达GhWRKYs转基因拟南芥盐胁迫分析 | 第64-74页 |
| 3.11.1 过量表达GhWRKY34转基因拟南芥盐胁迫分析 | 第64-69页 |
| 3.11.2 过量表达GhWRKY31转基因拟南芥盐胁迫分析 | 第69-72页 |
| 3.11.3 过量表达GhWRKY12转基因拟南芥盐胁迫分析 | 第72-74页 |
| 3.12 不同胁迫处理离体胚中GhWRKY12/16的表达情况 | 第74-75页 |
| 3.13 GhWRKYl2/16OE与RNAi棉花转化及继代培养工作 | 第75-77页 |
| 四、讨论 | 第77-82页 |
| 4.1 棉花WRKY蛋白具有典型的WRKY结构域 | 第77页 |
| 4.2 GhWRKYs可能在棉花生长发育以及非生物胁迫中发挥作用 | 第77-79页 |
| 4.3 过量表达GhWRKY基因导致转基因拟南芥耐盐性发生改变 | 第79-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 在校期间发表的论文及参加的学术会议 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
