| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第12-43页 |
| 1. 可变剪接调控的介绍 | 第12-31页 |
| 1.1 前体 RNA 可变剪接 | 第12-16页 |
| 1.2 剪接位点的识别和选择 | 第16页 |
| 1.3 帮助剪接位点识别 | 第16-19页 |
| 1.4 抑制剪接位点识别 | 第19-21页 |
| 1.5 位置依赖性的剪接调控 | 第21-22页 |
| 1.6 RNA 结构在可变剪接调控中的作用 | 第22-23页 |
| 1.7 蛋白因子调控可变剪接 | 第23-25页 |
| 1.8 转录偶联的可变剪接调控 | 第25页 |
| 1.9 可变剪接和组织特异性 | 第25-28页 |
| 1.10 组成型剪接调控因子调控可变剪接 | 第28-29页 |
| 1.11 可变剪接与人类疾病 | 第29-30页 |
| 1.12 展望 | 第30-31页 |
| 2. SMA 和 SMN 的介绍 | 第31-40页 |
| 2.1 SMA 疾病的介绍 | 第31-35页 |
| 2.2 SMA 疾病相关的 SMN2 外显子 7 可变剪接的机制 | 第35-38页 |
| 2.3 SMA 的治疗方面的进展 | 第38-40页 |
| 3. hnRNP U 的介绍 | 第40-41页 |
| 4. 本课题的研究内容及意义 | 第41-43页 |
| 4.1 课题研究的内容 | 第41-42页 |
| 4.2 课题的研究意义 | 第42-43页 |
| 第二章 材料和方法 | 第43-80页 |
| 1. 材料 | 第43-49页 |
| 1.1 菌株、质粒及细胞系 | 第43页 |
| 1.2 生化药品及来源 | 第43-44页 |
| 1.3 细胞培养及操作相关的试剂 | 第44页 |
| 1.4 酶类和 DNA marker，蛋白 marker | 第44-45页 |
| 1.5 抗体及其相关 | 第45页 |
| 1.6 ssRNA 和 siRNA 合成 | 第45-46页 |
| 1.7 本研究所用引物 | 第46-48页 |
| 1.8 分析软件和网络资源 | 第48页 |
| 1.9 图像编辑软件 | 第48页 |
| 1.10 仪器 | 第48-49页 |
| 2. 溶液的配制 | 第49-52页 |
| 2.1 细菌用抗生素的配制 | 第49页 |
| 2.2 蛋白纯化中所用的缓冲液 | 第49-50页 |
| 2.3 DMEM 细胞培养基的配制 | 第50页 |
| 2.4 细胞专用 PBS 的制备 | 第50-51页 |
| 2.5 细胞专用胰酶的配制 | 第51页 |
| 2.6 免疫沉淀及免疫印迹相关溶液的配方 | 第51-52页 |
| 3. 方法 | 第52-80页 |
| 3.1 E. coli RNase III 的制备和纯化 | 第52-54页 |
| 3.2 人类 RNA 结合蛋白 esiRNA 库的制备 | 第54-61页 |
| 3.3 细胞培养和转染 | 第61-63页 |
| 3.4 免疫印迹 | 第63页 |
| 3.5 RT-PCR | 第63-65页 |
| 3.6 Trizol 中提取蛋白 | 第65页 |
| 3.7 突变克隆 | 第65-66页 |
| 3.8 克隆的构建 | 第66页 |
| 3.9 免疫共沉淀 | 第66-67页 |
| 3.10 RIP-PCR | 第67页 |
| 3.11 免疫共定位 | 第67-68页 |
| 3.12 CLIP-seq 实验流程及注意事项 | 第68-78页 |
| 3.13 RNA-seq | 第78-80页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第80-97页 |
| 1. RNAi 筛选发现 HnRNP U 是一个新的抑制 SMN2 可变外显子 7 剪接的剪接调控因子。 | 第80-83页 |
| 2．hnRNP U 沉默同样会增强 SMN1 的剪接，暗示 hnRNP U 不是通过靶向外显子 7 的 C 到 T 变化所产生的 ESS 而起作用的 | 第83-85页 |
| 3. hnRNP U 抑制 SMN2 的剪接不依赖于任何已知的 ISS | 第85-86页 |
| 4. hnRNP U 可能不是通过影响转录延伸来抑制 SMN 外显子７的剪接的 | 第86-87页 |
| 5. hnRNP U 在体外不与 SMN2 外显子 7 及附近的内含子 RNA 结合，而在细胞内结合 SMN2 转录本 | 第87-88页 |
| 6. 大规模筛选人类 RNA 结合蛋白发现了另外 8 个新的抑制 SMN2 外显子 7 剪接的蛋 白质，其中 5 个是与 U2 snRNP 相互作用的蛋白 | 第88-91页 |
| 7. hnRNP U 与 U2AF65/35 通过 RNA 依赖的方式相互结合，并协同调控 SMN2 外显 子 7 的剪接 | 第91-92页 |
| 8. CLIP 鉴定 hnRNP U 结合的 RNA 靶标 | 第92-94页 |
| 9. hnRNP U 结合 U2 snRNA，证明它是 U2 snRNP 的一个重要组分 | 第94-97页 |
| 第四章 研究工作总结和展望 | 第97-100页 |
| 参考文献 | 第100-114页 |
| 研究生期间发表或待发表论文 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 缩写索引 | 第116-117页 |
