| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 蜡梅(Chimonanthus praecox(L.)Link.)研究与利用 | 第12-15页 |
| 1.1.1 蜡梅的形态特征和生物学性状 | 第12页 |
| 1.1.2 蜡梅的生理生化研究 | 第12-13页 |
| 1.1.3 分子生物学的研究 | 第13页 |
| 1.1.4 栽培技术的研究 | 第13-14页 |
| 1.1.5 修剪技术的研究 | 第14页 |
| 1.1.6 应用的研究 | 第14-15页 |
| 1.2 α-半乳糖苷酶的研究应用 | 第15-20页 |
| 1.2.1 α-半乳糖苷酶分类 | 第15页 |
| 1.2.2 α-半乳糖苷酶的酶学性质 | 第15-16页 |
| 1.2.3 α-半乳糖苷酶在高等植物中的生理功能 | 第16-17页 |
| 1.2.4 α-半乳糖苷酶在禽料中的应用 | 第17页 |
| 1.2.5 α-半乳糖苷酶在食品中的应用 | 第17-18页 |
| 1.2.6 α-半乳糖苷酶在医药中的应用 | 第18-20页 |
| 第2章 引言 | 第20-22页 |
| 2.1 研究背景 | 第20页 |
| 2.2 研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 第3章 CpGAL基因的克隆与分子特性 | 第22-38页 |
| 3.1 技术路线 | 第22页 |
| 3.2 实验材料 | 第22-23页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第22页 |
| 3.2.2 菌株、载体和主要试剂 | 第22页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 3.2.4 自配的主要试剂 | 第23页 |
| 3.3 实验方法 | 第23-29页 |
| 3.3.1 蜡梅叶片DNA的提取 | 第23-24页 |
| 3.3.2 蜡梅叶片RNA的提取 | 第24-25页 |
| 3.3.3 cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| 3.3.4 CpGAL基因5'及3'RACE模板合成 | 第25-26页 |
| 3.3.5 利用5'RACE克隆CpGAL基因5'端cDNA序列 | 第26-29页 |
| 3.3.6 CpGAL基因cDNA的生物信息学分析 | 第29页 |
| 3.4 结果与分析 | 第29-36页 |
| 3.4.1 CpGAL基因的克隆及其cDNA序列特征 | 第29-31页 |
| 3.4.2 CpGAL基因Blastx分析及CpGAL蛋白质保守结构域分析 | 第31-32页 |
| 3.4.3 CpGAL基因编码蛋白的结构分析 | 第32-36页 |
| 3.5 讨论 | 第36-38页 |
| 第4章 蜡梅CpGAL基因原核表达载体构建及目的蛋白表达 | 第38-48页 |
| 4.1 技术路线 | 第38-39页 |
| 4.2 实验材料和试剂 | 第39-40页 |
| 4.2.1 菌株、载体及主要试剂 | 第39页 |
| 4.2.2 主要设备 | 第39页 |
| 4.2.3 自配的主要试剂 | 第39-40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-44页 |
| 4.3.1 蜡梅CpGAL基因基因原核表达载体的构建 | 第40-42页 |
| 4.3.2 目的蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| 4.3.3 SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达 | 第43页 |
| 4.3.4 包涵体纯化 | 第43-44页 |
| 4.3.5 蛋白质含量的测定 | 第44页 |
| 4.3.6 蜡梅α-半乳糖苷酶酶学性质和分析 | 第44页 |
| 4.4 结果与分析 | 第44-46页 |
| 4.4.1 蜡梅CpGAL基因原核表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 4.4.2 pET28a-CpGAL在BL21(DE3)中的表达 | 第45-46页 |
| 4.4.3 重组目的蛋白的分离纯化及复性 | 第46页 |
| 4.5 讨论 | 第46-48页 |
| 第5章 蜡梅CpGAL转录的实时荧光定量分析 | 第48-56页 |
| 5.1 实验材料 | 第48页 |
| 5.1.1 植物材料及生长条件 | 第48页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 5.1.3 主要仪器设备与耗材 | 第48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 5.2.1 蜡梅组织的采集 | 第48页 |
| 5.2.2 蜡梅不同时期花芽的采集 | 第48-49页 |
| 5.2.3 蜡梅的不同激素处理 | 第49页 |
| 5.2.4 总RNA提取 | 第49页 |
| 5.2.5 cDNA第一链合成 | 第49页 |
| 5.2.6 CpGAL表达特性分析 | 第49-50页 |
| 5.3 结果与分析 | 第50-55页 |
| 5.3.1 总RNA提取 | 第50-51页 |
| 5.3.2 CpGAL表达特性分析 | 第51-53页 |
| 5.3.3 CpGAL表达的实时荧光定量分析 | 第53-55页 |
| 5.4 讨论 | 第55-56页 |
| 第6章 植物表达载体的构建及转化烟草研究 | 第56-66页 |
| 6.1 技术路线 | 第56页 |
| 6.2 实验材料和试剂 | 第56-57页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第56页 |
| 6.2.2 主要仪器 | 第56页 |
| 6.2.3 自配的主要试剂 | 第56-57页 |
| 6.3 实验方法 | 第57-61页 |
| 6.3.1 植物表达载体的构建 | 第57-60页 |
| 6.3.2 烟草的遗传转化 | 第60页 |
| 6.3.3 转基因植株的检测 | 第60-61页 |
| 6.4 结果与分析 | 第61-64页 |
| 6.4.1 植物表达载体的构建 | 第61页 |
| 6.4.2 烟草的遗传转化 | 第61-62页 |
| 6.4.3 转基因植株的检测 | 第62-64页 |
| 6.5 讨论 | 第64-66页 |
| 第7章 总结 | 第66-68页 |
| 7.1 结论 | 第66页 |
| 7.2 特色 | 第66-67页 |
| 7.3 下一步工作计划 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 缩略词表 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-78页 |
| 在校期间发表论文和参与项目 | 第78页 |
