| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 醛酮还原酶YtbE的分类和结构 | 第10-11页 |
| 1.2 醛酮还原酶YtbE的应用 | 第11-14页 |
| 1.2.1 YtbE催化醛的还原反应 | 第11-12页 |
| 1.2.2 YtbE催化酮的还原反应 | 第12-14页 |
| 1.2.2.1 YtbE的酮类底物谱 | 第12-13页 |
| 1.2.2.2 YtbE催化还原邻氯苯甲酰甲酸甲酯(CBFM) | 第13-14页 |
| 1.3 酶的失活因素及其失活机理 | 第14-17页 |
| 1.3.1 酶的失活简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 酶失活机理的研究方法 | 第15-17页 |
| 1.3.2.1 生物化学和生物物理方法 | 第15-16页 |
| 1.3.2.2 失活动力学 | 第16-17页 |
| 1.4 酶的稳定化 | 第17-20页 |
| 1.4.1 稳定性添加剂 | 第18-19页 |
| 1.4.2 化学修饰 | 第19页 |
| 1.4.3 固定化 | 第19-20页 |
| 1.4.4 蛋白质工程 | 第20页 |
| 1.5 本课题的意义和主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第2章 醛酮还原酶YtbE失活因素的研究 | 第21-32页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 主要实验试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2 培养基 | 第22页 |
| 2.2.3 分析方法 | 第22-23页 |
| 2.2.3.1 SDS-PAGE | 第22页 |
| 2.2.3.2 酶活力测定 | 第22-23页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.4.1 蛋白表达及蛋白纯化 | 第23页 |
| 2.2.4.2 醛酮还原酶YtbE的热稳定性研究 | 第23页 |
| 2.2.4.3 底物CBFM对YtbE稳定性的影响 | 第23-24页 |
| 2.2.4.4 产物(R)-CMM对YtbE稳定性的影响 | 第24页 |
| 2.2.4.5 还原反应中其他因素对YtbE稳定性的影响 | 第24页 |
| 2.2.4.6 底物CBFM和产物(R)-CMM共同存在下对YtbE稳定性的影响 | 第24页 |
| 2.2.4.7 影响YtbE稳定性的关键性官能团 | 第24页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第24-31页 |
| 2.3.1 醛酮还原酶YtbE的纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.2 醛酮还原酶YtbE的热稳定性 | 第25-26页 |
| 2.3.3 底物CBFM对YtbE稳定性的影响 | 第26页 |
| 2.3.4 产物(R)-CMM对YtbE稳定性的影响 | 第26-28页 |
| 2.3.5 还原反应中其他因素对YtbE稳定性的影响 | 第28-29页 |
| 2.3.6 底物CBFM和产物(R)-CMM共同存在时对YtbE稳定性的影响 | 第29-30页 |
| 2.3.7 影响YtbE稳定性的关键性官能团 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 醛酮还原酶YtbE失活机制的研究 | 第32-43页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 材料与方法 | 第32-34页 |
| 3.2.1 主要实验试剂和仪器 | 第32页 |
| 3.2.2 非还原性SDS-PAGE | 第32页 |
| 3.2.3 紫外可见吸收光谱分析 | 第32页 |
| 3.2.4 荧光光谱分析 | 第32-33页 |
| 3.2.5 圆二色谱分析 | 第33页 |
| 3.2.6 动力学模拟 | 第33-34页 |
| 3.2.6.1 简单的一级失活动力学模型 | 第33页 |
| 3.2.6.2 两步连续的失活模型 | 第33-34页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第34-41页 |
| 3.3.1 非还原性SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 3.3.2 紫外-可见吸收光谱分析 | 第35-36页 |
| 3.3.3 荧光光谱分析 | 第36-38页 |
| 3.3.4 圆二色谱分析 | 第38-39页 |
| 3.3.5 失活动力学分析 | 第39-41页 |
| 3.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第4章 醛酮还原酶YtbE的稳定化策略 | 第43-55页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 材料与方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 主要实验试剂和仪器 | 第43页 |
| 4.2.2 各种添加剂对YtbE热稳定性的影响 | 第43页 |
| 4.2.3 各种添加剂对YtbE操作稳定性的影响 | 第43-44页 |
| 4.2.4 定点突变体C183S | 第44页 |
| 4.2.5 冻干酶粉与冻干细胞的制备 | 第44页 |
| 4.2.6 酶促不对称还原CBFM的反应 | 第44-45页 |
| 4.2.7 荧光分析及其他 | 第45页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第45-54页 |
| 4.3.1 YtbE热稳定性的提高 | 第45-48页 |
| 4.3.2 YtbE操作稳定性的强化 | 第48-50页 |
| 4.3.3 YtbE催还还原CBFM反应性能的强化 | 第50-54页 |
| 4.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第5章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 全文总结与创新点 | 第55-56页 |
| 5.2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 攻读硕士期间撰写的论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
