| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 猪流行性腹泻的研究进展 | 第13-33页 |
| 1 猪流行性腹泻病毒分子结构 | 第13-16页 |
| 1.1 S基因结构及特征 | 第14-15页 |
| 1.2 ORF3结构与特征 | 第15页 |
| 1.3 E基因结构与特征 | 第15-16页 |
| 1.4 M基因结构与特征 | 第16页 |
| 1.5 N基因结构与特征 | 第16页 |
| 2 PEDV流行病学特点 | 第16-17页 |
| 3 PEDV分子流行病学调查 | 第17-18页 |
| 4 PEDV诊断方法 | 第18-20页 |
| 4.1 RT-PCR法 | 第18-19页 |
| 4.2 ELISA法 | 第19页 |
| 4.3 免疫荧光法(IF) | 第19-20页 |
| 4.4 电镜法(EM) | 第20页 |
| 4.5 逆转录环介导等温扩增方法(RTLAMP) | 第20页 |
| 4.6 血凝实验 | 第20页 |
| 5 PEDV疫苗及免疫 | 第20-23页 |
| 5.1 PEDV灭活疫苗 | 第21页 |
| 5.2 PEDV弱毒疫苗 | 第21-22页 |
| 5.3 基因工程疫苗 | 第22页 |
| 5.4 核酸疫苗 | 第22页 |
| 5.5 乳酸杆菌疫苗 | 第22-23页 |
| 5.6 亚单位疫苗 | 第23页 |
| 5.7 转基因植物疫苗 | 第23页 |
| 6 PED预防和治疗 | 第23-24页 |
| 7 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-33页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒检测及分子流行病学调查 | 第33-55页 |
| 1 材料与方法 | 第34-39页 |
| 1.1 材料 | 第34页 |
| 1.1.1 试剂 | 第34页 |
| 1.1.2 病料 | 第34页 |
| 1.2 方法 | 第34-39页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第34-35页 |
| 1.2.2 病料处理及RNA提取 | 第35页 |
| 1.2.3 RT-PCR扩增 | 第35-36页 |
| 1.2.4 S基因克隆与测序 | 第36-38页 |
| 1.2.5 序列分析和系统进化树绘制 | 第38-39页 |
| 1.2.6 S基因编码氨基酸序列比对分析 | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-50页 |
| 2.1 PEDV检测及S基因扩增 | 第39-40页 |
| 2.2 S基因重组质粒的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3 S基因系统进化分析 | 第41-43页 |
| 2.4 S基因核苷酸序列同源性分析 | 第43-45页 |
| 2.5 S基因氨基酸序列与抗原表位分析 | 第45-50页 |
| 2.5.1 PEDV S基因氨基酸序列分析 | 第45-48页 |
| 2.5.2 PEDV S基因糖基化位点及抗原表位变异分析 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 第三章 PAPN的原核表达及抗体制备 | 第55-73页 |
| 1 材料与方法 | 第56-63页 |
| 1.1 材料 | 第56页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第56页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 1.2 方法 | 第56-63页 |
| 1.2.1 pAPN重组表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 1.2.2 重组质粒的鉴定 | 第58-59页 |
| 1.2.3 重组蛋白的表达与鉴定 | 第59-62页 |
| 1.2.4 兔抗pAPN抗体的制备与鉴定 | 第62-63页 |
| 2 结果 | 第63-69页 |
| 2.1 目的基因的扩增 | 第63-64页 |
| 2.2 重组质粒的构建和鉴定 | 第64-65页 |
| 2.2.1 重组质粒的构建 | 第64页 |
| 2.2.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第64-65页 |
| 2.2.3 重组质粒双酶切鉴定 | 第65页 |
| 2.3 SDS-PAGE鉴定蛋白的表达及表达条件优化 | 第65-67页 |
| 2.4 重组蛋白表达形式鉴定及蛋白纯化 | 第67页 |
| 2.5 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第67-68页 |
| 2.6 兔多抗效价的测定 | 第68页 |
| 2.7 兔多抗Western blot鉴定 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 第四章 表达PAPN细胞系的构建及PAPN活性研究 | 第73-93页 |
| 1 材料与方法 | 第73-80页 |
| 1.1 材料 | 第73-74页 |
| 1.1.1 细胞和毒株 | 第74页 |
| 1.1.2 质粒 | 第74页 |
| 1.1.3 试剂 | 第74页 |
| 1.2 方法 | 第74-80页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第74页 |
| 1.2.2 pAPN扩增 | 第74页 |
| 1.2.3 重组质粒的构建 | 第74-75页 |
| 1.2.4 重组质粒的鉴定 | 第75-76页 |
| 1.2.5 慢病毒包装 | 第76-78页 |
| 1.2.6 细胞表达pAPN的鉴定 | 第78-79页 |
| 1.2.7 pAPN活性研究 | 第79-80页 |
| 1.2.8 单克隆细胞筛选和稳定性鉴定 | 第80页 |
| 2 结果 | 第80-88页 |
| 2.1 目的基因的扩增 | 第80页 |
| 2.2 重组质粒的构建与鉴定 | 第80-82页 |
| 2.2.1 重组质粒PCR鉴定 | 第80-81页 |
| 2.2.2 重组质粒双酶切鉴定 | 第81-82页 |
| 2.3 慢病毒的获得 | 第82页 |
| 2.4 Vero细胞对嘌呤霉素的耐受浓度 | 第82页 |
| 2.5 细胞系的鉴定 | 第82-83页 |
| 2.5.1 RT-PCR鉴定 | 第82-83页 |
| 2.5.2 IFA鉴定 | 第83页 |
| 2.6 pAPN活性研究 | 第83-87页 |
| 2.6.1 Vero-APN对PEDV易感性 | 第83-84页 |
| 2.6.2 Vero-APN对PEDV增殖的影响 | 第84-87页 |
| 2.7 细胞系单克隆筛选和稳定性鉴定 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 全文总结 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
