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猪CCL17基因的克隆与原核和真核表达

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-12页
文献综述第12-22页
 第一章 趋化因子CCL17 的相关研究进展第12-22页
   ·趋化因子概述第12-13页
     ·趋化因子第12页
     ·趋化因子受体第12-13页
   ·趋化因子CCL17 概述第13-14页
     ·CCL17 结构及生物学特性第13-14页
   ·CCL17 在某些疾病中的研究概况第14-19页
     ·CCL17 与特应性皮炎第14-15页
       ·C CL17 与支气管哮喘第15-19页
       ·C CL17 与系统性红斑狼疮第19页
     ·CCL17 与STAT6 的相关研究第19-21页
     ·STAT6 概述第19-20页
     ·JAK/STAT 信号转导途径第20页
     ·CCL17 与STAT6 的研究第20-21页
   ·展望第21-22页
试验研究第22-55页
 第二章 猪CCL17 基因的克隆及序列分析第22-32页
   ·材料第22-24页
     ·组织来源第22页
     ·主要试剂和工具酶第22-23页
     ·菌株及载体第23页
     ·主要仪器与设备第23页
     ·培养基及试剂配制第23-24页
     ·CaCl2 法转化用材料第24页
     ·主要分子生物学软件第24页
   ·方法第24-28页
     ·基因CCL10 的序列来源第24页
     ·CCL17 基因的分子克隆第24-28页
     ·阳性重组质粒的酶切鉴定第28页
     ·CCL17 基因序列测定与结果分析第28页
   ·结果与分析第28-30页
     ·通过EST 数据库得到的猪CCL17 基因的序列第28-29页
     ·CCL17 基因的PCR 扩增第29-30页
     ·重组克隆载体pMD-CCL17 的构建与测序第30页
   ·讨论第30-31页
   ·小结第31-32页
 第三章 猪CCL17 基因在大肠杆菌中的表达第32-42页
   ·材料第32-35页
     ·主要仪器第32页
     ·菌株与质粒第32页
     ·主要工具酶和试剂第32-33页
     ·CaCl2 法转化所需材料第33页
     ·普通试剂的配制第33页
     ·SDS-PAGE 常用试剂配制第33-35页
   ·方法第35-38页
     ·CCL17 基因原核表达载体质粒的构建第35-36页
     ·重组质粒的提取第36页
     ·重组质粒转化E.coli BL21第36-37页
     ·重组质粒的鉴定第37页
     ·重组质粒在大肠杆菌中的表达第37页
     ·表达产物的SDS-PAGE 检测第37-38页
   ·结果与分析第38-41页
     ·CCL17 基因的PCR 扩增第38-39页
     ·重组克隆载体pMD-CCL17 的构建与测序第39页
     ·重组原核表达载体pET-CCL17 的双酶切鉴定第39-40页
     ·CCL17 重组蛋白的表达第40-41页
   ·讨论第41页
     ·原核表达系统的选择第41页
     ·CCL17 外源蛋白融合表达的特点第41页
   ·小结第41-42页
 第四章 猪CCL17 基因在哺乳动物细胞中的表达第42-55页
   ·材料第42-45页
     ·质粒与菌株第42页
     ·主要试剂、工具酶和耗材第42页
     ·主要仪器与设备第42-43页
     ·细胞培养用试剂第43页
     ·D-Hanks 液的配制(1 000mL)第43-44页
     ·细胞消化试剂 ATV(Antibiotic trypsin versen)第44页
     ·免疫印迹所需材料第44-45页
   ·方法第45-50页
     ·CCL17 重组克隆载体质粒的构建第45-47页
     ·CCL17 基因真核重组表达质粒的构建第47-48页
     ·pEGFP-CCL17 重组质粒大提第48-49页
     ·pEGFP-CCL17 及pEGFP-C1 质粒转染SUVEC 细胞第49页
     ·Western-Blot 检测pEGFP-CCL17 在SUVEC 中的表达第49-50页
   ·结果与分析第50-53页
     ·CCL17 基因的PCR 扩增结果第50页
     ·重组克隆载体pMD-CCL17 的构建与测序第50-51页
     ·重组真核表达载体pEGFP-CCL17 的鉴定第51页
     ·重组质粒pEGFP-CCL17 在SUVEC 细胞中的转染第51-52页
     ·pEGFP-CCL17 在SUVEC 表达产物的Western-Blot 检测第52-53页
   ·讨论第53-54页
     ·脂质体介导的基因转染第53页
     ·真核表达载体的选择第53-54页
     ·CCL17 转染SUVEC 细胞第54页
   ·小结第54-55页
结论第55-56页
参考文献第56-62页
附录第62-64页
致谢第64-65页
个人简介第65页

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