| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第9-14页 |
| 1 前言 | 第14-17页 |
| 1.1 阴道毛滴虫及阴道毛滴虫病 | 第14页 |
| 1.2 阴道毛滴虫致病机制 | 第14-15页 |
| 1.3 研究意义 | 第15-17页 |
| 2 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1 使用仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.3 质粒和宿主菌 | 第19-20页 |
| 2.4 阴道毛滴虫虫株，细胞系及实验动物 | 第20-21页 |
| 3 实验方法及步骤 | 第21-43页 |
| 3.1 阴道毛滴虫RRas基因的生物学分析 | 第21页 |
| 3.2 引物设计 | 第21页 |
| 3.3 阴道毛滴虫培养 | 第21-23页 |
| 3.3.1 TYM培养基 | 第21-22页 |
| 3.3.2 青霉素钠,硫酸链霉素储存液 | 第22页 |
| 3.3.3 培养方法 | 第22-23页 |
| 3.3.4 阴道毛滴虫保存，复苏 | 第23页 |
| 3.4 阴道毛滴虫总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 3.4.1 实验准备 | 第23页 |
| 3.4.2 阴道毛滴虫Total RNA的提取步骤： | 第23-24页 |
| 3.4.3 注意事项 | 第24页 |
| 3.5 逆转录获得总c DNA | 第24-25页 |
| 3.6 PCR扩增目的基因片段 | 第25-26页 |
| 3.6.1 PCR引物设计 | 第25页 |
| 3.6.2 插入片段PCR扩增 | 第25-26页 |
| 3.7 PCR产物检测 | 第26页 |
| 3.7.1 1.5％琼脂糖凝胶的制备 | 第26页 |
| 3.7.2 检测方法 | 第26页 |
| 3.8 PCR产物纯化 | 第26-27页 |
| 3.8.1 PCR产物纯化试剂盒实验准备 | 第26页 |
| 3.8.2 操作步骤 | 第26-27页 |
| 3.9 质粒提取 | 第27-28页 |
| 3.9.1 相关试剂的配置方法 | 第27页 |
| 3.9.2 质粒小量制备试剂盒实验准备 | 第27页 |
| 3.9.3 快速操作步骤 | 第27-28页 |
| 3.10 质粒胶回收 | 第28-29页 |
| 3.10.1 使用实验准备 | 第28页 |
| 3.10.2 快速操作步骤 | 第28-29页 |
| 3.11 质粒线性化 | 第29页 |
| 3.12 目的基因与质粒的重组反应 | 第29-30页 |
| 3.13 BL21感受态制备 | 第30-31页 |
| 3.14 反应产物转化、涂板 | 第31页 |
| 3.15 质粒阴阳性克隆鉴定 | 第31-32页 |
| 3.16 重组表达质粒PQE-80L/ Tv RRas双酶切鉴定 | 第32页 |
| 3.17 诱导表达 | 第32页 |
| 3.18 1.0mm SDS-PAGE凝胶制作 | 第32-33页 |
| 3.18.1 试剂组成 | 第32-33页 |
| 3.18.2 操作步骤 | 第33页 |
| 3.19 重组蛋白的可溶性鉴定 | 第33-34页 |
| 3.19.1 一步法细菌活性蛋白提取 | 第33页 |
| 3.19.2 操作步骤 | 第33-34页 |
| 3.19.3 鉴定步骤 | 第34页 |
| 3.20 可溶性蛋白纯化、复性及保存 | 第34-36页 |
| 3.20.1 Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒组成 | 第35页 |
| 3.20.2 操作步骤 | 第35页 |
| 3.20.3 透析及保存 | 第35-36页 |
| 3.21 Western-blot鉴定 | 第36-37页 |
| 3.21.1 试剂配制 | 第36页 |
| 3.21.2 Western-blot操作步骤 | 第36-37页 |
| 3.22 动物实验 | 第37-40页 |
| 3.22.1 ELISA相关试剂配制 | 第37-38页 |
| 3.22.2 免疫小鼠制备抗血清 | 第38-40页 |
| 3.23 阴道毛滴虫重组蛋白western-blot分析 | 第40页 |
| 3.24 细胞实验 | 第40-42页 |
| 3.24.1 细胞培养准备 | 第40页 |
| 3.24.2 实验前准备 | 第40-41页 |
| 3.24.3 洗手和着装 | 第41页 |
| 3.24.4 细胞复苏 | 第41页 |
| 3.24.5 CCK8实验 | 第41-42页 |
| 3.25 数据处理 | 第42-43页 |
| 4 结果 | 第43-62页 |
| 4.1 Tv RRas的生物学分析 | 第43-48页 |
| 4.2 引物设计 | 第48-49页 |
| 4.3 阴道毛滴虫RRas基因PCR扩增 | 第49-50页 |
| 4.4 PQE-80L载体质粒线性化结果 | 第50-51页 |
| 4.5 质粒阴阳性克隆鉴定 | 第51-52页 |
| 4.6 重组表达质粒PQE-80L/ Tv RRas双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 4.7 测序结果 | 第53-54页 |
| 4.8 重组蛋白的可溶性分析 | 第54-55页 |
| 4.9 重组蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 4.10 阴道毛滴虫RRas重组蛋白的Western-blot | 第56-59页 |
| 4.11 细胞实验 | 第59-62页 |
| 4.11.1 蛋白浓度测定标准曲线 | 第59页 |
| 4.11.2 CCK8实验结果 | 第59-62页 |
| 5. 讨论 | 第62-66页 |
| 5.1 阴道毛滴虫RRas一步克隆表达的分析 | 第62-63页 |
| 5.2 阴道毛滴虫western-blot分析 | 第63-64页 |
| 5.3 细胞实验分析 | 第64-66页 |
| 6 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 综述 | 第76-92页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 个人简历 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
