| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 肿瘤转移 | 第13-16页 |
| 1.1.1 肿瘤转移方式 | 第13-14页 |
| 1.1.2 肿瘤转移机制 | 第14-15页 |
| 1.1.3 肝癌转移机制 | 第15-16页 |
| 1.2 miRNA概述 | 第16-22页 |
| 1.2.1 miRNA的结构及合成方式 | 第16-18页 |
| 1.2.2 miRNA的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 miRNA的功能 | 第19-20页 |
| 1.2.4 miRNA与肿瘤 | 第20-21页 |
| 1.2.5 miRNA与糖基化修饰 | 第21-22页 |
| 1.3 糖基化修饰 | 第22-28页 |
| 1.3.1 糖基化修饰概述 | 第22-24页 |
| 1.3.2 糖基化的类型 | 第24-26页 |
| 1.3.3 糖基化修饰与肿瘤转移 | 第26-27页 |
| 1.3.4 唾液酸与肿瘤转移 | 第27-28页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 2 小鼠肝癌细胞株淋巴道转移能力的鉴定 | 第29-35页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第29页 |
| 2.2.2 实验细胞 | 第29页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.3.2 小鼠足垫注射肝癌细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.3 小鼠淋巴结的获取和HE染色 | 第32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-34页 |
| 2.4.1 小鼠肝癌细胞株的鉴定结果 | 第32-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 3 小鼠肝癌细胞淋巴道转移相关候选miRNA的筛选 | 第35-41页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.2.1 实验细胞 | 第35页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第35页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-38页 |
| 3.3.1 根据芯片结果筛选候选miRNA | 第36页 |
| 3.3.2 细胞培养 | 第36-37页 |
| 3.3.3 总RNA的提取 | 第37页 |
| 3.3.4 RT-PCR反应获取6个候选miRNA | 第37-38页 |
| 3.3.5 qPCR实验获取6个候选miRNA在三种细胞中的相对表达量 | 第38页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第38-40页 |
| 3.4.1 6种候选miRNA在芯片表达谱中表达倍数的差异 | 第38-39页 |
| 3.4.2 miRNA-9在三种小鼠肝癌细胞中的表达量具有显著差异 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 4 miRNA-9对St6gal1的调控作用 | 第41-59页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料 | 第41-44页 |
| 4.2.1 实验细胞 | 第41页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第41-42页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第42-43页 |
| 4.2.4 实验溶液的配制 | 第43-44页 |
| 4.3 实验方法 | 第44-52页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第44页 |
| 4.3.2 miRNA-9靶基因的预测 | 第44页 |
| 4.3.3 蛋白质免疫印迹分析(Western blot) | 第44-46页 |
| 4.3.4 细胞瞬时转染 | 第46-47页 |
| 4.3.5 双荧光素酶报告基因的构建 | 第47-52页 |
| 4.3.6 流式细胞术检测上调、下调miRNA-9后小鼠肝癌细胞中SNA糖链的变化 | 第52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-58页 |
| 4.4.1 St6gal1与miRNA-9序列的结合位点 | 第52-53页 |
| 4.4.2 St6gal1在三种小鼠肝癌细胞中的表达量具有显著差异 | 第53-54页 |
| 4.4.3 miRNA-9抑制St6gal1在三种小鼠肝癌细胞中的表达 | 第54-55页 |
| 4.4.4 miRNA-9抑制α-2,6连接唾液酸在三种小鼠肝癌细胞表面的表达量 | 第55-57页 |
| 4.4.5 St6gal1是miRNA-9的靶基因之一 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 5 miRNA-9对小鼠肝癌细胞转移潜能的抑制作用及分子机制 | 第59-72页 |
| 5.1 引言 | 第59页 |
| 5.2 实验材料 | 第59-60页 |
| 5.2.0 实验细胞 | 第59页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第59页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第59-60页 |
| 5.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第60页 |
| 5.3.2 细胞瞬时转染 | 第60-61页 |
| 5.3.3 蛋白质免疫印迹分析(Western blot) | 第61页 |
| 5.3.4 CCK-8试剂盒检测细胞增殖 | 第61页 |
| 5.3.5 Transwell小室实验检测细胞迁移能力 | 第61-62页 |
| 5.3.6 Transwell小室实验检测细胞侵袭能力 | 第62页 |
| 5.3.7 细胞黏附能力的检测 | 第62页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第62-71页 |
| 5.4.1 miRNA-9抑制小鼠肝癌细胞增殖能力 | 第62-63页 |
| 5.4.2 miRNA-9抑制小鼠肝癌细胞迁移能力 | 第63-65页 |
| 5.4.3 miRNA-9抑制小鼠肝癌细胞侵袭能力 | 第65-67页 |
| 5.4.4 miRNA-9抑制小鼠肝癌细胞黏附能力 | 第67-68页 |
| 5.4.5 小鼠肝癌细胞黏附能力改变的分子机制 | 第68-71页 |
| 5.5 小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
