致谢 | 第7-11页 |
中文摘要 | 第11-13页 |
Abstract | 第13-14页 |
第1章 文献综述 | 第15-28页 |
1.1 微孢子虫概述 | 第15-16页 |
1.2 微孢子虫结构、组成与侵染方式 | 第16-19页 |
1.2.1 微孢子虫的细胞结构与组成 | 第16-17页 |
1.2.2 微孢子虫的侵染方式 | 第17-19页 |
1.3 细胞凋亡研究概述 | 第19-24页 |
1.3.1 细胞凋亡研究进展 | 第20-21页 |
1.3.2 家蚕细胞凋亡通路研究进展 | 第21-22页 |
1.3.3 细胞色素C与昆虫细胞凋亡的关系 | 第22-24页 |
1.4 细胞凋亡与病原微生物的关系 | 第24-26页 |
1.5 研究意义与目标 | 第26页 |
1.6 研究内容与技术路线 | 第26-28页 |
1.6.1 研究内容 | 第26-27页 |
1.6.2 技术路线 | 第27-28页 |
第2章 差异蛋白质组分析家蚕微孢子虫对宿主BmN细胞的影响 | 第28-44页 |
2.1 实验材料 | 第29-33页 |
2.1.1 生物材料 | 第29页 |
2.1.2 主要仪器与设备 | 第29页 |
2.1.3 主要试剂及配制 | 第29-33页 |
2.2 实验方法 | 第33-37页 |
2.2.1 家蚕微孢子虫繁殖、纯化及细胞感染 | 第33页 |
2.2.2 透射电镜观察家蚕微孢子虫感染BmN细胞 | 第33-34页 |
2.2.3 蛋白样品的提取和定量 | 第34-35页 |
2.2.4 样品总蛋白的双向电泳 | 第35-36页 |
2.2.5 不同处理样本的质谱分析及数据库搜索 | 第36-37页 |
2.3 结果 | 第37-42页 |
2.3.1 电镜观察微孢子虫胞内增殖情况 | 第37-38页 |
2.3.2 不同细胞样品蛋白浓度 | 第38-39页 |
2.3.3 不同感染时期和未感染细胞总蛋白的双向电泳分析 | 第39-40页 |
2.3.4 质谱鉴定结果 | 第40-42页 |
2.4 讨论与分析 | 第42-44页 |
第3章 生物信息学分析以及相关蛋白的验证 | 第44-64页 |
3.1 实验材料 | 第44-46页 |
3.1.1 生物材料 | 第44-45页 |
3.1.2 主要仪器与设备 | 第45页 |
3.1.3 主要试剂及配置 | 第45-46页 |
3.2 实验方法 | 第46-52页 |
3.2.1 相关蛋白点的生物信息学分析 | 第46页 |
3.2.2 家蚕微孢子虫的繁殖、纯化及细胞感染实验 | 第46页 |
3.2.3 家蚕微孢子虫感染4龄幼虫实验 | 第46-47页 |
3.2.4 相关蛋白的细胞水平表达检测 | 第47-50页 |
3.2.5 相关蛋白的组织水平表达检测 | 第50-51页 |
3.2.6 谷胱甘肽酶活性测定 | 第51-52页 |
3.3 实验结果 | 第52-60页 |
3.3.1 生物信息学分析蛋白点功能分类 | 第52-54页 |
3.3.2 差异蛋白分析 | 第54-55页 |
3.3.3 细胞水平mRNA验证结果 | 第55-57页 |
3.3.4 组织水平mRNA验证结果 | 第57-60页 |
3.3.5 谷胱甘肽-S-转移酶活性测定变化 | 第60页 |
3.4 讨论与分析 | 第60-64页 |
第4章 家蚕微孢子虫对宿主BmN细胞凋亡的抑制作用 | 第64-84页 |
4.1 实验材料 | 第64-69页 |
4.1.1 生物材料 | 第64-65页 |
4.1.2 主要仪器与设备 | 第65页 |
4.1.3 主要试剂及配制 | 第65-69页 |
4.2 实验方法 | 第69-75页 |
4.2.1 家蚕微孢子虫的繁殖、纯化及细胞感染 | 第69页 |
4.2.2 家蚕BmN细胞凋亡诱导实验 | 第69页 |
4.2.3 家蚕微孢子虫感染BmN细胞后凋亡片段观察 | 第69-70页 |
4.2.4 流式细胞术分析家蚕微孢子虫感染BmN细胞后凋亡实验 | 第70页 |
4.2.5 ROS检测 | 第70页 |
4.2.6 凋亡相关基因的表达分析 | 第70-73页 |
4.2.7 细胞色素C表达量分析 | 第73-75页 |
4.2.8 数据统计分析 | 第75页 |
4.3 实验结果 | 第75-81页 |
4.3.1 ActD不同处理时间诱导BmN细胞DNA片段化分析 | 第75-76页 |
4.3.2 家蚕微孢子虫抑制ActD诱导的BmN细胞DNA片段化结果 | 第76-77页 |
4.3.3 流式细胞术检测家蚕微孢子虫抑制BmN细胞凋亡结果 | 第77-78页 |
4.3.4 家蚕微孢子虫感染后BmN细胞的ROS检测结果 | 第78-80页 |
4.3.5 凋亡相关基因的表达分析结果 | 第80页 |
4.3.6 细胞色素C表达量分析结果 | 第80-81页 |
4.4 讨论与分析 | 第81-84页 |
第5章 后记 | 第84-86页 |
参考文献 | 第86-96页 |
博士学习期间发表的论文 | 第96-97页 |
附录1 主要缩略词 | 第97-98页 |
附录2 差异蛋白的生物信息分析 | 第98-99页 |
附图A KEGG代谢信号通路分析结果 | 第98页 |
附图B 参与细胞成分蛋白聚类结果 | 第98-99页 |
附图C 参与生化过程蛋白聚类结果 | 第99页 |
附图D 蛋白分子功能聚类结果 | 第99页 |