英文缩略词 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
英文摘要 | 第11-14页 |
第一部分 Pin1基因敲减对SH-SY5Y神经细胞氧反常损伤的影响 | 第15-53页 |
引言 | 第15-19页 |
材料和方法 | 第19-32页 |
1 材料 | 第19-20页 |
1.1 实验细胞 | 第19页 |
1.2 慢病毒表达系统 | 第19页 |
1.3 主要试剂及试剂盒 | 第19-20页 |
1.4 实验仪器设备 | 第20页 |
2 方法 | 第20-32页 |
2.1 SH-SY5Y细胞培养 | 第20-21页 |
2.2 细胞分组与模型制备 | 第21页 |
2.3 慢病毒制备 | 第21-23页 |
2.4 慢病毒感染SH-SY5Y细胞 | 第23-24页 |
2.5 检测慢病毒感染的效果 | 第24-25页 |
2.6 倒置荧光显微镜观察细胞形态 | 第25-26页 |
2.7 Western blot检测Pin1、p-Bim、Bax蛋白表达水平 | 第26-28页 |
2.8 MTT法检测细胞存活率 | 第28-29页 |
2.9 AO/EB染色法检测细胞凋亡 | 第29-30页 |
2.10 细胞免疫荧光法检测Pin1、Hsp60、p-Bim蛋白的表达 | 第30页 |
2.11 JC-1 试剂盒检测线粒体膜电位(ΔΨm) | 第30-31页 |
2.12 数据分析 | 第31-32页 |
结果 | 第32-47页 |
1 光镜观察SH-SY5Y神经细胞的形态 | 第32-33页 |
1.1 正常SH-SY5Y神经细胞的形态 | 第32页 |
1.2 不同时限OGD/R后SH-SY5Y神经细胞形态变化 | 第32-33页 |
2 Pin1蛋白在SH-SY5Y神经细胞中的表达定位 | 第33-34页 |
2.1 Pin1和Hsp60蛋白在SH-SY5Y细胞线粒体中的表达 | 第33页 |
2.2 Pin1和p-BimEL蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达 | 第33-34页 |
3 Pin1蛋白在不同时限OGD/R后SH-SY5Y细胞中的表达变化 | 第34-35页 |
4 慢病毒感染敲减SH-SY5Y神经细胞中的Pin1基因 | 第35-37页 |
4.1 敲减Pin1基因后SH-SY5Y细胞中的Pin1表达变化 | 第35-37页 |
4.2 敲减Pin1基因后SH-SY5Y细胞中的Bim mRNA表达变化 | 第37页 |
5 敲减Pin1基因对OGD2h/R24h后SH-SY5Y细胞损伤的影响 | 第37-47页 |
5.1 对SH-SY5Y细胞存活率的影响 | 第37-38页 |
5.2 对SH-SY5Y细胞凋亡的影响 | 第38-40页 |
5.3 对SH-SY5Y细胞Pin1、p-Bim蛋白表达的影响 | 第40-43页 |
5.4 对SH-SY5Y细胞Bax蛋白表达的影响 | 第43-45页 |
5.5 对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响 | 第45-47页 |
讨论 | 第47-52页 |
小结 | 第52-53页 |
第二部分 Pin1基因敲减对SH-SY5Y神经细胞迁移的影响 | 第53-67页 |
引言 | 第53-54页 |
材料和方法 | 第54-57页 |
1 材料 | 第54页 |
1.1 实验细胞 | 第54页 |
1.2 慢病毒表达系统 | 第54页 |
1.3 主要试剂及试剂盒 | 第54页 |
1.4 实验仪器设备 | 第54页 |
2 方法 | 第54-57页 |
2.1 细胞培养 | 第54-55页 |
2.2 慢病毒制备 | 第55页 |
2.3 慢病毒感染SH-SY5Y神经细胞 | 第55页 |
2.4 检测慢病毒感染的效果 | 第55页 |
2.5 Transwell实验检测细胞的迁移能力 | 第55页 |
2.6 划痕实验检测细胞的迁移能力 | 第55-56页 |
2.7 RT-PCR检测Pin1、Vimentin、Cyclin D1、MMP2基因的表达 | 第56页 |
2.8 Western blot检测Pin1、Vimentin、JNK、c-Jun、p-c-Jun(s73)、p-c-Jun(s473)、Akt、p-Akt蛋白的表达 | 第56页 |
2.9 数据分析 | 第56-57页 |
结果 | 第57-64页 |
1 筛选稳定敲减Pin1基因的SH-SY5Y神经细胞 | 第57-58页 |
1.1 观察稳定敲减Pin1基因的SH-SY5Y神经细胞形态变化 | 第57-58页 |
1.2 敲减Pin1基因后SH-SY5Y细胞中Pin1蛋白的表达变化 | 第58页 |
2 敲减Pin1基因抑制SH-SY5Y细胞迁移能力的研究 | 第58-64页 |
2.1 敲减Pin1基因对SH-SY5Y细胞Vimentin蛋白的影响 | 第58-59页 |
2.2 Transwell实验检测细胞的迁移能力变化 | 第59-60页 |
2.3 划痕实验检测细胞的迁移能力变化 | 第60-62页 |
2.4 敲减Pin1基因对SH-SY5Y细胞Cyclin D1、Vimentin、MMP2mRNA表达的影响 | 第62页 |
2.5 敲减Pin1基因对SH-SY5Y细胞Akt、p-Akt、JNK、c-Jun、p-c-Jun(s73)、p-c-Jun(s473)蛋白的影响 | 第62-64页 |
讨论 | 第64-66页 |
小结 | 第66-67页 |
参考文献 | 第67-73页 |
综述 | 第73-84页 |
参考文献 | 第79-84页 |
致谢 | 第84页 |