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Pin1基因敲减对SH-SY5Y神经细胞氧反常损伤与细胞迁移的影响

英文缩略词第6-8页
中文摘要第8-11页
英文摘要第11-14页
第一部分 Pin1基因敲减对SH-SY5Y神经细胞氧反常损伤的影响第15-53页
    引言第15-19页
    材料和方法第19-32页
        1 材料第19-20页
            1.1 实验细胞第19页
            1.2 慢病毒表达系统第19页
            1.3 主要试剂及试剂盒第19-20页
            1.4 实验仪器设备第20页
        2 方法第20-32页
            2.1 SH-SY5Y细胞培养第20-21页
            2.2 细胞分组与模型制备第21页
            2.3 慢病毒制备第21-23页
            2.4 慢病毒感染SH-SY5Y细胞第23-24页
            2.5 检测慢病毒感染的效果第24-25页
            2.6 倒置荧光显微镜观察细胞形态第25-26页
            2.7 Western blot检测Pin1、p-Bim、Bax蛋白表达水平第26-28页
            2.8 MTT法检测细胞存活率第28-29页
            2.9 AO/EB染色法检测细胞凋亡第29-30页
            2.10 细胞免疫荧光法检测Pin1、Hsp60、p-Bim蛋白的表达第30页
            2.11 JC-1 试剂盒检测线粒体膜电位(ΔΨm)第30-31页
            2.12 数据分析第31-32页
    结果第32-47页
        1 光镜观察SH-SY5Y神经细胞的形态第32-33页
            1.1 正常SH-SY5Y神经细胞的形态第32页
            1.2 不同时限OGD/R后SH-SY5Y神经细胞形态变化第32-33页
        2 Pin1蛋白在SH-SY5Y神经细胞中的表达定位第33-34页
            2.1 Pin1和Hsp60蛋白在SH-SY5Y细胞线粒体中的表达第33页
            2.2 Pin1和p-BimEL蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达第33-34页
        3 Pin1蛋白在不同时限OGD/R后SH-SY5Y细胞中的表达变化第34-35页
        4 慢病毒感染敲减SH-SY5Y神经细胞中的Pin1基因第35-37页
            4.1 敲减Pin1基因后SH-SY5Y细胞中的Pin1表达变化第35-37页
            4.2 敲减Pin1基因后SH-SY5Y细胞中的Bim mRNA表达变化第37页
        5 敲减Pin1基因对OGD2h/R24h后SH-SY5Y细胞损伤的影响第37-47页
            5.1 对SH-SY5Y细胞存活率的影响第37-38页
            5.2 对SH-SY5Y细胞凋亡的影响第38-40页
            5.3 对SH-SY5Y细胞Pin1、p-Bim蛋白表达的影响第40-43页
            5.4 对SH-SY5Y细胞Bax蛋白表达的影响第43-45页
            5.5 对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响第45-47页
    讨论第47-52页
    小结第52-53页
第二部分 Pin1基因敲减对SH-SY5Y神经细胞迁移的影响第53-67页
    引言第53-54页
    材料和方法第54-57页
        1 材料第54页
            1.1 实验细胞第54页
            1.2 慢病毒表达系统第54页
            1.3 主要试剂及试剂盒第54页
            1.4 实验仪器设备第54页
        2 方法第54-57页
            2.1 细胞培养第54-55页
            2.2 慢病毒制备第55页
            2.3 慢病毒感染SH-SY5Y神经细胞第55页
            2.4 检测慢病毒感染的效果第55页
            2.5 Transwell实验检测细胞的迁移能力第55页
            2.6 划痕实验检测细胞的迁移能力第55-56页
            2.7 RT-PCR检测Pin1、Vimentin、Cyclin D1、MMP2基因的表达第56页
            2.8 Western blot检测Pin1、Vimentin、JNK、c-Jun、p-c-Jun(s73)、p-c-Jun(s473)、Akt、p-Akt蛋白的表达第56页
            2.9 数据分析第56-57页
    结果第57-64页
        1 筛选稳定敲减Pin1基因的SH-SY5Y神经细胞第57-58页
            1.1 观察稳定敲减Pin1基因的SH-SY5Y神经细胞形态变化第57-58页
            1.2 敲减Pin1基因后SH-SY5Y细胞中Pin1蛋白的表达变化第58页
        2 敲减Pin1基因抑制SH-SY5Y细胞迁移能力的研究第58-64页
            2.1 敲减Pin1基因对SH-SY5Y细胞Vimentin蛋白的影响第58-59页
            2.2 Transwell实验检测细胞的迁移能力变化第59-60页
            2.3 划痕实验检测细胞的迁移能力变化第60-62页
            2.4 敲减Pin1基因对SH-SY5Y细胞Cyclin D1、Vimentin、MMP2mRNA表达的影响第62页
            2.5 敲减Pin1基因对SH-SY5Y细胞Akt、p-Akt、JNK、c-Jun、p-c-Jun(s73)、p-c-Jun(s473)蛋白的影响第62-64页
    讨论第64-66页
    小结第66-67页
参考文献第67-73页
综述第73-84页
    参考文献第79-84页
致谢第84页

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